Melyek az IVD-nyersanyagok különböző enzimjeinek jellemzői és alkalmazásai?
A polimeráz láncreakció (PCR) egy olyan molekuláris biológiai technika, amelyet specifikus DNS-töredékek felerősítésére használnak, ami a szervezeten kívüli DNS-reprodukciónak tekinthető, és amelynek során a DNS-töredékek parányi mennyiségei olyan mértékben felerősödnek, hogy könnyen azonosíthatók és felismerhetők.
A PCR-reakciókban az "enzimek" döntő szerepet játszanak, és az egyes "enzimtípusok" eltérő aktivitással és funkcióval rendelkeznek. Milyen típusú enzimek léteznek? És milyen alkalmazások vannak az IVD területén?
DNS-polimeráz
Meghatározás: Az enzim egy olyan enzimtípus, amely a DNS-t használja templátként, a DNS 5 végétől a 3 végéig replikálódik, és katalizálja a szubsztrát dNTP-molekulák polimerizációját, hogy leány-DNS-t képezzen.
Főbb tevékenységek és szerepek: katalizálják a DNS-szintézist. 1, polimerizáció. 2, 3, → 5, exonukleáz aktivitás - korrektor szerep 3, 5, → 3, exonukleáz aktivitás - excíciós javító szerep 4, pirofoszfát hidrolízis szerep 5, pirofoszfát csere.
Az IVD területén gyakori DNS-polimerázok a következők: A Taq hot-start enzim, amely kémiai módosítással zárja le a Taq enzim aktivitását, mielőtt a reakciórendszert 70°C-ra melegítik, ezáltal gátolja a nem specifikus amplifikációt. Nagy hűségű DNS-polimeráz, amely polimerizációs központot és hasítóközpontot tartalmaz, a polimerizációs központ 5′-3′ polimeráz aktivitással rendelkezik, amely a polimerizációért felelős; a hasítóközpont 3′-5′ exonukleáz aktivitással rendelkezik (más néven korrektúraolvasó aktivitás), amely a párosítatlan nukleotidok kivágásáért felelős. (más néven proofreading-aktivitás), amely a párosítatlan nukleotidok kivágásáért felelős.
reverz transzkriptáz
Meghatározás: Olyan enzim, amely RNS-t használ templátként, és az RNS-templáthoz 5′-3′ irányban komplementer egyetlen DNS-szálat szintetizál.
Főbb tevékenységek és szerepek: 1. RNS-irányított DNS-polimeráz aktivitás. 2. RNáz H aktivitás 3. DNS-irányított DNS-polimeráz aktivitás.
Alkalmazás az IVD területén: Az IVD-technológiában: 1, reverz transzkripciós polimeráz láncreakció (RT-PCR) 2, cDNS könyvtár építése 3, RNS szekvenálás 4, RT-qPCR , 2019 New Crown Nucleic Acid Detection konfigurált rendszer reagensek, elkerülhetetlenül csatlakozik a reverz transzkriptázhoz. Ennek oka, hogy az RNS-vírusokat a PCR-reakciók elvégzéséhez DNS-re kell fordítottan átírni.
RNS-polimeráz
Meghatározás: DNS- vagy RNS-lánc mint sablon polimeráz, mert a sejtben a genetikai információ DNS-átírás, más néven transzkriptáz.
Főbb tevékenységek és szerepek: 1, DNS-sel mint templát; 2, katalizálja a nukleinsavak szintézisét polimerizációs reakciók révén; 3, a nukleotidok 3,→5,-foszfodiészter kötéseket képeznek; 4, a báziskomplementer párosítás elve szerint 5′-3′ irányban átírja a templát szekvenciát.
Az IVD területén elterjedt RNS-polimerázok közé tartozik a T7 RNS-polimeráz, amely specifikusan katalizálja az RNS-képzés folyamatát az 5'→3′ irányban. Jelenleg az in vitro diagnosztikában a SAT technológia a T7 RNS-polimeráz alkalmazása az RNS-amplifikációhoz. Ezt a technológiát széles körben használják a kórokozók kimutatásában, a vérvírusszűrésben és a környezeti mikrobák kimutatásában.
Proteináz K
Meghatározás: A proteináz K egy erős proteolitikus enzim, amelyet a Candida albicansból izoláltak, és a DNS extrakció kulcsfontosságú reagensének számít.
Fő funkciója: a membránfehérjék és a DNS-hez kötött fehérjék lebontása, valamint a DNS felszabadulásának elősegítése. Alkalmazás az IVD területén: plazmid, genomi DNS, RNS izolálására és extrakciójára. A vírusos nukleinsav kimutatásában a proteináz K képes a vírusos kapszid fehérjéket hasítani és inaktiválni, miközben felszabadítja a vírus genomot a teljes nukleinsav extrakcióhoz.
UDG enzim
Meghatározás: alias uracil-DNS-glikoziláz, más néven uracil-N-glikoziláz vagy UNGáz. A DNS és az RNS monomereket alkotó és a genetikai információt kódoló kémiai szerkezet.
Funkció: A maradék PCR-szennyezés hatékony ellenőrzése. Alkalmazás az IVD-ben: A klinikai tesztekhez használt PCR-reagensek UDG enzimet tartalmaznak a szennyeződés megelőzése érdekében.
Endonukleáz
Definíció: Az enzimek olyan osztálya, amely felismer egy adott nukleotidszekvenciát, és a két dezoxiribonukleotid közötti foszfodiészterkötést az egyes láncok egy adott helyén hasítja; restrikciós enzimeknek nevezik.
Szerep: 3 típus létezik: 1. típus: mind a módosítási, mind a felismerési hasítás, a hasítási hely távol van a felismerési szekvenciától. 2. típus: csak felismerési hasítás, a hasítási hely a felismerési szekvencia. 3. típus: mind a módosítási, mind a felismerési hasítás, a hasítási hely és a felismerési szekvencia közelebb van egymáshoz.
Alkalmazások az IVD területén: 1, génlokalizáció és génizolálás, 2, DNS molekuláris bázissorrend-elemzés, 3, géntechnológiai szerkesztés, 4, a DNS fizikai térképének kialakítása.
Dekonjugáló enzim
Meghatározás: az ATP-hidrolízis által biztosított energiát használja fel a kettős szálú DNS-nukleotidok párosítása során kialakult hidrogénkötések feloldására, hogy egyszálú DNS-t alkossanak.
Szerepe: szerepet játszik a DNS vagy RNS dekonvolúciójának katalizálásában a DNS vagy RNS replikáció során.
Alkalmazás az IVD területén: A qPCR-ben alkalmazott termikus denaturációs folyamat helyett hőstabilizált dekonjugáló enzimet használ a kettős szál felbontására és az amplifikáció kiterjesztésére. Ez a technika kevésbé hajlamos a nem specifikus amplifikációra, és a PCR-ciklusban a hőmérséklet emelésének és csökkentésének folyamatát is elkerüli, és csak egyszerű felszerelést igényel a kimutatáshoz.
Módosító enzim
Meghatározás: Az RNS vagy a DNS beépítését katalizáló enzim, vagy az eredeti bázisokat módosítja, hogy megakadályozza a restrikciós endonukleázok általi pusztulást.
Szerep: Más enzimek szerkezetének kovalens módosítása úgy, hogy azok átalakulnak egy magasan aktív és egy viszonylag kevésbé aktív forma között.
Alkalmazás az IVD-ben: A HTMR-módszer erős bizonyítékot szolgáltat a DNS/RNS-metilációt célzó kis molekuláris modulátorok felfedezéséhez és aktivitásértékeléséhez.
Pirofoszfatáz
DEFINÍCIÓ: Olyan enzim, amely katalizálja egy molekula pirofoszfát átalakulását két molekula foszfátionná.
Funkció: A hőstabil szervetlen pirofoszfatáz 100% még mindig aktív, ha 4 órán át 100°C-on melegítik, így PCR-reakciókban felhasználható a PCR-nek a keletkező szervetlen pirofoszfát által okozott gátlás megszüntetésére és a DNS-replikáció fokozására.
taq antitest
Meghatározás: Taq DNS-polimeráz elleni antitest.
Funkció: A Taq antitest a Taq enzimhez kötődve gátolja a DNS-polimeráz aktivitását a magas hőmérsékleten történő denaturáció előtt, és hatékonyan gátolja a primerek nem specifikus lágyulását és a primer dimer által okozott nem specifikus amplifikációt alacsony hőmérsékleten.
Alkalmazás az IVD-ben: A Taq-antitest magas visszatartási hatékonysága javíthatja az új koronavírus nukleinsav kimutatási készlet kimutatási érzékenységét, és segítheti az új koronavírus kimutatását.
A standard PCR-folyamat három lépésre oszlik: A DNS denaturálása, lágyítása és hosszabbítása. Az inaktiválási reakció a PCR elején történhet 50°C-ra történő 10 perces vagy 95°C-ra történő 2 perces felmelegítéssel, és az UDG enzim megszünteti a reakciórendszerben lévő szennyező DNS által generált amplifikációt. Ezt követően a templát DNS-t magas hőmérsékleten egyszálú DNS-é denaturáljuk. két primer a két templát DNS-szálhoz kötődik a DNS-polimeráz és a megfelelő hőmérséklet mellett. A primerek ismét DNS-polimeráz alatt hosszabbodnak meg. a Taq antitest a Taq enzimhez kötődve gátolja a DNS-polimeráz aktivitását és alacsony hőmérsékleten gátolja a nem specifikus amplifikációt. Szervetlen pirofoszfatáz hozzáadása a PCR-reakcióhoz hidrolizálja a pirofoszfátot ortofoszfáttá, növelve a reakció amplifikációs hatékonyságát.
A nyersanyag-enzim a molekuláris vizsgálati ipar upstream ipari lánca.2020-ban a nukleinsav-tesztelés iránti hatalmas kereslet előtt a molekuláris diagnosztikai reagensek iránti piaci kereslet drámaian megnőtt, és a nyersanyag-enzimipar ennek következtében gyorsan fejlődött. Ami a termelést illeti, a molekuláris vizsgálati nyersanyag-enzimgyártás magas technikai küszöbértéke miatt a jelenlegi hazai piac főként az importtól függ. Az elmúlt években, a hazai termelési folyamat emelkedésével együtt, számos nyersanyag-ipari vállalkozás szerepel, a termékkategóriák is fokozatosan gazdagodnak, de tagadhatatlan, hogy a hazai IVD nyersanyagipar még mindig a fejlődés korai szakaszában van, a piaci részesedés is viszonylag kicsi, a jövő szükségszerűen nagyobb fejlesztési térben létezik.
Lépjen kapcsolatba velünk most!
Ha szüksége van Price-ra, kérjük, töltse ki elérhetőségét az alábbi űrlapon, általában 24 órán belül felvesszük Önnel a kapcsolatot. Ön is küldhet nekem e-mailt info@longchangchemical.com munkaidőben ( 8:30-18:00 UTC+8 H.-Szombat ) vagy használja a weboldal élő chatjét, hogy azonnali választ kapjon.
| Összetétel Glükoamiláz | 9032-08-0 |
| Pullulanase | 9075-68-7 |
| Xilanáz | 37278-89-0 |
| Celluláz | 9012-54-8 |
| Naringináz | 9068-31-9 |
| β-Amiláz | 9000-91-3 |
| Glükóz-oxidáz | 9001-37-0 |
| alfa-amiláz | 9000-90-2 |
| Pektináz | 9032-75-1 |
| Peroxidáz | 9003-99-0 |
| Lipáz | 9001-62-1 |
| Kataláz | 9001-05-2 |
| TANNASE | 9025-71-2 |
| Elasztáz | 39445-21-1 |
| Ureáz | 9002-13-5 |
| DEXTRANASE | 9025-70-1 |
| L-laktil-dehidrogenáz | 9001-60-9 |
| Dehidrogenáz malát | 9001-64-3 |
| Koleszterin-oxidáz | 9028-76-6 |