Proteáz és enzimtechnológia

1. Fehérjemérnökség: a fehérjék szerkezete és funkciója közötti kapcsolat tanulmányozásán alapuló, a géntechnológiai technológia vagy a kémiai módosítási technológia alkalmazása a meglévő fehérjék új fehérjékké történő átalakítására a modern biotechnológia területén.
2. enzimtechnológia: enzimek, organellák vagy sejtspecifikus katalitikus funkció felhasználása, megfelelő reaktoron keresztül emberi termékek iparszerű előállítása vagy egy műszaki tudomány meghatározott céljának elérése érdekében.
3. Az enzimtechnológiai kutatás fő tartalma: 1) kémiai enzimtechnika 2) biológiai enzimtechnika 3) immobilizált enzimek és sejtek 4) enzimreaktorok és szenzorok 5) enzimek nem vizes fázisú katalízise.
4. Fehérjefúzió: az egyik fehérjét kódoló gén egy részének rekombinációja egy másik fehérje génjéhez, vagy különböző fehérje gének töredékeinek kombinálása új fúziós fehérjék előállítása érdekében génklónozással és expresszióval.
5. A fehérjefúzió szerepe: 1) az expressziós termék izolálása és tisztítása; 2) az expressziós termék oldhatóságának javítása; 3) a fehérje stabilitásának javítása.
6. Fehérjekristallográfia: a biológiai makromolekulák szerkezeti vizsgálatának mérnöki munkája röntgendiffrakciós technológiával, a strukturális biológia fontos része.
8. célzott mutáció: egy adott gén helyi nukleotidszekvenciáját célzottan módosítják molekuláris klónozással, amelyet általában a fehérjék funkcionális szerkezetének tanulmányozására, valamint a célfehérjék módosítására használnak.
10. Az enzimtechnológia kutatási területe:
1) Különböző típusú természetes enzimek fejlesztése és előállítása;
2) Enzimek izolálása, tisztítása és azonosítási technikák;
3) Immobilizációs technikák;
4) Keresztbeporzás a biotechnológia más területeinek felhasználásával;
5) multienzimes reaktorok fejlesztése és alkalmazása.
11. Az enzimek stabilitása és stabilizálása:
(i) Az enzim inaktiválódásának okai:
(1) Az enzim aktív centrumában lévő néhány specifikus aminosavmaradékot kémiailag módosítanak, így az enzim aktivitása megszűnik (mikroszkópikusan);
(2) A külső környezet hatása, térbeli akadályok az enzim aktív központjában, így az nem tud kötődni a szubsztráthoz;
3) változások az enzim magasabb szerkezetében (változások a hélixben és a hajtogatásban);
4) a polipeptidlánc törése (nagyon erős);
(ii) Az enzim stabilizálása:
(1) alacsony hőmérsékleten történő tartósítás (maga az enzim nem denaturálódik, nem könnyű más enzimek számára lebontani a célfehérjét);
2) Sók hozzáadása (magas koncentrációjú (NH4)2SO4);
3) Ligandumok, például szubsztrát koenzimek hozzáadása;
4) erős denaturálószerek hozzáadása (az elsődleges struktúra védelme és felhasználáskor történő újraélesztése érdekében);
5) kristályosodás.
12. A mikroorganizmusok mint enzimforrások kiválósága:
1) Könnyű hozzáférés az enzimekhez szükséges enzimekhez;
2) könnyű hozzáférés a nagy hozamú törzsekhez;
3) rövid gyártási ciklus;
4) alacsony előállítási költség;
5) a termelés egyszerű irányítása;
6) További lehetőségek a mikrobiális enzimtermelés javítására.

13. Immobilizált enzim: Olyan enzimre utal, amely egy bizonyos térben, blokkolt állapotban létezik, amely folyamatosan képes a reakciót végrehajtani, és az enzim a reakció után visszanyerhető és újrafelhasználható.
14. Az immobilizált enzim előnyei:
1) Az immobilizált enzim rendkívül könnyen elválasztható a terméktől és a szubsztráttól;
2) Hosszú időn keresztül ismételt szakaszos reakciókat és folyamatos reakcióban töltött oszlopokat képes végrehajtani;
3) az enzim stabilitásának növelésére való képesség a legtöbb esetben;
4) az enzim reakciófolyamata szigorúan ellenőrizhető;
(5) Nincs enzimmaradék a termékoldatban, ami egyszerűsíti a tisztítási folyamatot;
6) Alkalmasabb a multienzimes reakcióhoz, mint a szabad enzim;
7) növelhető a termék hozama és javítható a termék minősége; 8) javul az enzimfelhasználás hatékonysága és csökkennek a költségek.
15. Az immobilizált enzim hátrányai:
1) Immobilizáció esetén az enzim aktivitása csökken;
2) Megnövekedett termelési költségek és nagy kezdeti beruházás az üzembe;
3) csak oldható szubsztrátokra használható, és inkább kis molekulájú szubsztrátokra alkalmas;
4) Az intakt bakteriofágokhoz képest nem alkalmasak multienzimes reakciókhoz, különösen azokhoz, amelyek kofaktorokat igényelnek;
5) az elválasztási eljárások, amelyeken a sejten belüli enzimeknek át kell esniük.
16. Immobilizált enzimek előállításának elvei:
1) Gondoskodni kell az enzim katalitikus aktivitásának és specificitásának fenntartásáról;
2) Az immobilizálásnak elő kell segítenie az automatizálást és a termelés folyamatosságát;
(3) Az immobilizált enzimnek a lehető legkisebb térbeli területi ellenállással kell rendelkeznie, hogy a lehető legkevésbé akadályozza a szén és a szubsztrát közelségét a termékhozam javítása érdekében;
4) Az enzimnek és a hordozónak erős kötőerővel kell rendelkeznie, hogy az immobilizált enzim visszanyerhető legyen, és a tárolás megkönnyítse az ismételt felhasználást;
(5) Az immobilizált enzimnek maximális stabilitással kell rendelkeznie, és a kiválasztott hordozónak nem szabad kémiai reakcióba lépnie a hulladéktermékkel vagy a reakcióoldattal;
(6) az immobilizált enzim költségének alacsonynak kell lennie, ami elősegíti az ipari felhasználást.
17. Az enzimek immobilizálásának módszerei:
(i) Nem kovalens kötési módszer:
(1) kristályosítási módszer: alacsony enzimaktivitású enzimekre alkalmazható, a koncentráció a kristályosítás után változik, és nincs veszteség az állandó folyamatos használatban;
(2) bomlási módszer: az enzimet száraz porrá alakítják, amelyet vízben oldhatatlan fázisban diszpergálnak, még akkor is, ha a száraz por az oldószerben szuszpendálódik, előnye: a visszanyerés kényelmesebb, hátránya: a száraz por könnyen elnyeli a vizet, a részecskék nagyobbak lesznek, az aktivitás csökken, és az enzim életképessége a szerves oldószerekben befolyásolja;
(3) Fizikai adszorpció: olyan módszer, amelyben az enzimet fizikailag adszorbeálják egy oldhatatlan hordozóra; Előny: az enzim aktív központja nem pusztul el könnyen, kevesebb változás a vezető szerkezetben, kevesebb enzimaktivitás-veszteség, immobilizált sejtekhez is alkalmas; Hátrány: gyenge kölcsönhatás az enzim és a hordozó között, az enzim könnyen leesik;
(4) A vízoldható hordozóhoz való kötődés ionos kötésen keresztül; Előnyök: egyszerű működés, enyhe körülmények, a vezető szerkezet és az aktív központ nem pusztulhat el, immobilizált sejtekre is alkalmazható; Hátrányok: a hordozó és az enzim kötőereje gyengébb, anionos vagy kationos puffer, az ionos koncentráció hatása a nagyobb, az enzim hajlamosabb a hordozóról való leesésre;
(ii) Kémiai kötési módszer:
(1) kovalens kötési módszer: az enzim és a hordozó kovalens kötés; módszer: a hordozóval kapcsolatos gén aktiválása, majd a reakció összekapcsolása az enzimmel kapcsolatos génekkel, a hordozó kötődése viszonylag erős, általában nem lesz rögzített szubsztrát koncentráció változik és változik; hátrányok: a reakció körülményei intenzívebbek, gyakran vezetnek a magas szintű szerkezet változásához, az aktív központ megsemmisítéséhez, csak az enzim immobilizálására alkalmazható, nem alkalmas a sejt immobilizálására;
(2) Keresztkötési módszer: multifunkcionális reagensek vagy bifunkcionális reagensek alkalmazásával, úgy, hogy az enzim és az enzim vagy a mikroorganizmusok és a mikrobiális sejtek keresztkötési immobilizációs módszere, általában a keresztkötőszer koncentrációjának és a reakcióidő csökkentésével az enzimaktivitás fenntartása érdekében;
(iii) Beágyazási módszer:
(1) rács típus: az enzim vagy mikroorganizmusok beágyazva egy finom rács polimer gél, ez a módszer a mikrobiális sejtek immobilizálása több módszerrel; Előnyök: nem kell kombinálni az enzim fehérje reakcióval, az enzim aktivitás visszanyerési aránya magas;
(2) mikrokapszula típus: az enzim molekula kapszulába van kapszulázva, a polimer membrán félig áteresztő, ez a kapszula átjárhatatlan és létezhet valamilyen vízmentes szerves fázisban.
18. Az immobilizált enzimek tulajdonságai:
(i) Az enzimaktivitás változása az immobilizálás után:
Okok: 1) Az enzimmolekula térbeli konformációja megváltozik az immobilizálás során, ami még az aktív központban lévő aminosavakat is érinti;
Az immobilizálás után az enzimmolekula térbeli szabadsága korlátozott, ami közvetlenül befolyásolja az aktív központ szubsztrátra gyakorolt vakuoláris hatását;
A belső diffúziós ellenállás miatt a szubsztrátmolekuláknak az aktív központhoz való közeledése ellenáll;
Beágyazott állapotban az enzimet egy polimer féligáteresztő membrán veszi körül, és a makromolekuláris szubsztrát nem tudja megközelíteni az enzimet a membránon keresztül;
Az immobilizáció hatása az enzim stabilitására:
A hőstabilitás növekszik;
2) Fokozott stabilitás különböző szerves reagensekkel és enzimreagensekkel szemben;
(3) A különböző pH-értékekkel szembeni stabilitás, a proteáz stabilitása, a tárolási stabilitás és az üzemi stabilitás hatással van;
(4) Az immobilizált enzim fokozott stabilitásának okai: az immobilizált enzim és a hordozó több ponton összekapcsolható, ami megakadályozhatja a proteáz molekula nyúlását és deformációját; az enzim életereje az immobilizálás után felszabadítható és felszabadítható; az enzim önlebontása gátolható;
(iii) Az optimális hőmérséklet változik -- nő;
(iv) Optimális pH-változás: a tartomány kiszélesítése;
(v) A Km változása (Mie-állandó változása -- kisebb lesz, az affinitás nő).
19.Az immobilizálás módszerei:
1) A koenzim és az enzim együttes immobilizálása ugyanazon a hordozón olyan rendszert eredményez, amely tartósan mentes a további koenzimektől;
2) a koenzimet közvetlenül az enzimmolekulán immobilizálják.
20. sejtimmobilizáció: a szabad mozgásban korlátozott sejtek, azaz a sejteket fizikai, kémiai és egyéb tényezők korlátozzák vagy bizonyos térbeli határok közé szorítják, de a sejtek továbbra is megőrzik katalitikus aktivitásukat és életképességük ismételt és folyamatos használatra alkalmas.
1. A sejtek immobilizálásának előnyei és hátrányai:
Előnyök: 1) Az immobilizált sejtek megőrzik az intracelluláris enzimrendszer eredeti állapotát és természetes környezetét, és így stabilabbak;
Fenntartja az eredeti multienzim rendszert a sejtben, a többlépéses katalitikus előny nyilvánvalóbb, nincs szükség koenzim regenerációra;
Nyilvánvaló előnyök az immobilizált burjánzó sejtes fermentációhoz; az immobilizált sejtek nagy sűrűsége, képes burjánzani, lerövidíteni a fermentációs termelési ciklust; jó fermentációs stabilitás, hosszabb ideig ismételhető folyamatos használatra; a fermentációs leves kevesebb organizmust tartalmaz, ami elősegíti a termék izolálását és tisztítását a termék minőségének javítása érdekében;
Hátrányok: 1) A sejtben lévő különböző enzimek jelenléte nem kívánt melléktermékeket képez;
A sejtmembránok, sejtfalak és a hordozók jelenléte diffúziós korlátot képezhet;
3) a hordozó által képzett pórusok mérete befolyásolja a polimer hordozó áteresztőképességét.
2. kémiai módosítás: amikor egy fehérje kovalens szerkezetét egy kémiai gén beépítésével vagy eltávolításával megváltoztatják, ezt a jelenséget kémiai módosításnak nevezzük.
3. A fehérjék funkcionális csoportreaktivitását befolyásoló tényezők: 1) a mikrorégiók polaritása: 2) hidrogénkötés hatása; 3) elektrosztatikus hatás; 4) helyblokkoló hatás.
4. Enzimfehérje funkcionális szintű hiperreaktivitás: a fehérje oldallánc génre és az egyes reagensekre utal, amelyek gyors reakciót mutathatnak.
5. A hiperreaktivitást befolyásoló tényezők: 1) a fehérjefunkció pK-értékének megváltozása; 2) a fehérje funkcionális csoportjának nagyobb reakcióképessége; 3) a reagens vonzása elektrosztatikus kölcsönhatások és megfelelő orientáció révén; 4) sztereokémiai adaptációk a reagens és a módosítási helyhez közeli fehérje régiók között.
6. A módosító reaktivitásának meghatározói: 1) szelektív adszorpció; 2) elektrosztatikus kölcsönhatások; 3) helyblokkoló tényezők; 4) katalitikus tényezők: 5) mikrorégió polaritása (a helyi környezet polaritása).
7. A módosítási reakció specifikusságának ellenőrzése:
(i) A reagensek kiválasztása:
(1) Az aminosavak módosításának számos esete létezik:
a. Az összes aminocsoport módosítása más gének módosítása nélkül;
b.Az alfa-aminocsoport módosítása ellenmódosítással;
c. módosítása az aminocsoport katalitikus aktivitással; d. a fehérjék töltött állapotának és oldhatóságának megváltoztatása, a fehérjék töltött állapotának megváltoztatása, hogy olyan reagenseket válasszon, amelyek semleges körülmények között a maximális töltést hordozzák, a fehérjék oldhatóságának megváltoztatása, a reakció vízben történik, a vízben oldódó kémiai reagensek kiválasztása; 3) a reakciótermék mennyiségi meghatározása; 4) a reagens méretének figyelembevétele: a reagens mérete kisebb, hogy megkönnyítse a módosítást, anélkül, hogy nagy változásokat okozna a fehérje konformációjában;
A reakciókörülmények kiválasztása:
A reakciókörülmények nem okozzák a fehérje visszafordíthatatlan denaturációját;
A reakciókörülmények megválasztása elősegíti a fehérjék specifikus módosítását;
(iii) reakcióspecifikusság: 1) felhasználhatja a fehérje egyes génjeinek specifitását; 2) válasszon különböző reakció-pH-t; 3) használjon bizonyos termék-instabilitást; 4) affinitásjelölés; 5) differenciális jelölés: a rendszerben, ha vannak enzimmolekulák, szubsztrátok, inhibitorok; 6) a fehérje állapotának különbségének használata.
8. Affinitási reagens: más néven helyspecifikus inhibitorok, a reagens egy génre hat a befolyásolt helyen, és nem lép kölcsönhatásba más génekkel a befolyásolt helyen kívül, és az ilyen típusú módosítót affinitási reagensnek nevezik.
9. Affinitás címkézés: affinitás reagensek általában hasonló szerkezetű, mint a szubsztrát, az aktív hely az enzim nagyfokú affinitás az aktív hely az aminosav-maradványok lehet kovalensen jelölt, ez a fajta kémiai módosítás a specifitás a címkézés az affinitás, más néven a specifitás az irreverzibilis gátlás.
10. immobilizált enzim: egy bizonyos térben, zárt állapotban, folyamatos hatás léphet fel, és végül újrahasznosítható.
11. hogyan befolyásolja az immobilizáció az enzim stabilitását az alábbi három hatáson keresztül: 1) térbeli akadályt hoz létre; 2) diffúziós korlátozást hoz létre; 3) többpontos kovalens kötés.
12. stabilizációs módszerek:
(i) immobilizáció (kémiai kötés, beágyazási módszer stb.): 1) térbeli akadályok létrehozása: a kémiai inaktiválás gátlása; 2) diffúziós korlátozás létrehozása: az enzim beágyazása a porózus részecskék belsejébe, ahol a szubsztrát érintkezik a porózus részecskék felületével, mielőtt a belső térbe diffundálna, hogy kölcsönhatásba lépjen az enzimmel, a szubsztrát koncentrációja által nem szabályozva; 3) többpontos kovalens kötés: az enzim többpontos és kovalens kötése a hordozó felületéhez, vagy az enzim keresztkötése bifunkcionális reagenssel, vagy az enzimnek a hordozóba történő beágyazása A szűk pórus szilárdabbá teheti az enzimkonformációt, így megakadályozza az enzimkonformáció túlzott mértékű hajtogatási állapotból nyújtási állapotba való átfordulását.
13. Ribonukleáz: A katalitikus aktivitással rendelkező RNS leírása, amelynek kémiai természete az, hogy a ribonukleinsav katalitikus funkciója egy enzim, és a szubsztrát lehet egy másik molekula vagy ugyanazon RNS-molekula egyes részei.
14. Természetes nukleázok: a) nyíró típusú nukleázok (katalizálják az ön- és heterogén RNS elvágását, nukleinsav-endonukleázok): 1) kalapácsfej-típusú nukleáz; 2) hajtű-típusú nukleáz; 3) fehérje-RNS komplex enzim; b) splicing-típusú nukleázok: beleértve az Ⅰ csoportos intront és az Ⅱ csoportos intront; az RNS önfelhasításának elérése; nukleinsav-endonukleáz és ligáz aktivitással.
15. In vitro szelekció: nagy kapacitású, véletlenszerűen rendezett RNS- vagy DNS-molekulákból felépített véletlenszerű molekulakönyvtárból kiindulva, amelyben nagyon kis számú, specifikus funkcióval rendelkező molekulát szűrnek.
16. Aptamer: Azokat az RNS- vagy DNS-töredékeket, amelyek specifikusan és hatékonyan képesek ligandumokhoz, például szerves anyagokhoz vagy fehérjékhez kötődni, RNS-aptamereknek, illetve DNS-aptamereknek nevezzük.
17. Szűrő aptamer program: 1) kémiailag szintetizál egy könyvtár DNS-molekulák, egy pozícióban a molekulalánc bevezetése teljesen véletlenszerű vagy részben mutáns sorrendben, a molekula végei egy rögzített sorrendben, annak érdekében, hogy PCR-amplifikáció; 2) néhány forduló PCR-amplifikáció után, in vitro átírás, hogy egy könyvtárat képezzen véletlenszerűen rendezett RNS; 3) ezek az RNS-molekulák a célmolekulák affinitáskromatográfiás oszlopok kombinációján keresztül, az RNS és a célmolekula kötődési képességének mérete szerint megkülönböztetésre kerül, a kötőerős RNS-molekulák végül lefelé eluálódtak; 4) eluált RNS-molekulák fordított átírás, PCR-amplifikáció, átírás után, a következő szűrési ciklusban, 5-10 ciklus után, hogy megkapjuk a könyvtárat, amely nagy affinitású RNS-molekulákkal dúsított célmolekulákkal gazdagodott.
18. A nukleázok szűrési folyamata: 1) átírásával egy véletlen szekvencia RNS építeni egy véletlen könyvtár DNS; 2) véletlen könyvtár katalitikus aktivitás molekulák katalizálhatják a szubsztrát és végezzen kovalens ligáció; 3) a reakció termék az immobilizált a szubsztrát RNS 5 "végén a szekvenciális komplementer párosítása oligonukleotid affinitás oszlopok, szelektív adszorpció a véletlen könyvtár azok, akik katalizálhatják az RNS molekulák a ligációs reakcióban; 4) Miután nagy só elúció: reverz transzkripció, PCR-amplifikáció, transzkripció, és belépés a következő szűrési körbe; 5) A következő szűrési ciklusban az aktív molekulákba bizonyos gyakorisággal mutációkat viszünk be hibás PCR-rel, ami növeli a szűréssel nyert random könyvtár molekuláris poliszelektivitását; 6) Több szűrési kör után a katalitikus aktivitású RNS-molekulák feldúsulnak, és a viszonylag kevésbé aktív molekulák kiesnek.
19. dezoxiribonukleáz: egyszálú, katalitikus funkcióval rendelkező, in vitro molekuláris evolúciós technikákkal szintetizált DNS-fragmentum, amely hatékony katalitikus aktivitással és szerkezetfelismeréssel rendelkezik.
1. In vitro szelekciós módszer: 1) DNS-molekulák mesterséges szintetizálása transzkripció és reverz transzkripció nélkül, és közvetlenül PCR-amplifikáció; 2) egyszálú DNS-molekulák előállítása: A PCR-amplifikáció során a primerhez biotint kapcsolunk, és a PCR-terméket a biotinfehérje affinitási oszlopán vezetjük át a pozitív és negatív szálak szétválasztásának megvalósítása érdekében; 3) kétértékű fémionokat vezetünk be kofaktorokként; 4) néhány további funkcionális csoportot vezetünk be a DNS-be, hogy ezeket a dezoxiribonukleázokat célozzuk meg. további funkcionális csoportokat vezetünk be a DNS-be a strukturális és funkcionális affinitás növelése érdekében.
2. A dezoxiribonukleázok osztályozása: (RNS-t hasító dezoxiribonukleázok) (DNS-t hasító dezoxiribonukleázok) (kináz aktivitású dezoxiribonukleázok) (ligáz funkciójú dezoxiribonukleázok) (porfirin ciklohexil fém kelátképző reakciót katalizálnak).
3. antisense nukleinsav: olyan DNS- vagy RNS-molekula, amely egy mRNS-molekulához kötődik, és olyan térhelyi akadályt képez, amely megakadályozza, hogy az mRNS lebontása mellett a riboszómához kötődjön, és így fehérjévé transzlálódjon.
4. Az enzimmolekulák racionális tervezése: természetes enzimek vagy ténylegesen mutálható enzimek tanulmányozása különböző biokémiai, kristallográfiai, spektroszkópiai stb. módszerekkel az enzim molekuláris jellemzőinek megállapítása érdekében. Térbeli szerkezet. A szerkezet és a funkció, valamint az aminosavmaradványok és egyéb információk közötti kapcsolat, majd ennek felhasználása az enzimmódosítás alapjául.
5. Az enzimmolekula nem racionális tervezése: anélkül, hogy az enzimmolekula szerkezetére vonatkozó pontos információkra lenne szükség, az enzimmolekulát véletlenszerű mutációval, genetikai rekombinációval, üres szűréssel és más módszerekkel átalakítják, és a kívánt természetű mutáns enzimet irányítottan kiválasztják.
6. Az enzimmolekula irányított evolúciója: az enzimmolekula fejlesztési iránya; egy vagy több létező (természetes vagy mesterségesen előállított) szülői enzimből kiindulva, a gének mutációjával vagy rekombinációjával mesterséges mutáns enzimkönyvtárat hoz létre, és végül szűrés útján a vezető elvárások bizonyos tulajdonságaival rendelkező evolvált enzimet kapunk. Irányított evolúció = véletlenszerű mutáció + előremenő rekombináció + szelekció (vagy szűrés).
7. Hibás PCR: A Taq enzim PCR-amplifikációjához a Taq enzim mutációs gyakoriságát a reakciókörülmények beállításával változtatják, például az Mg2+ koncentrációjának növelésével, Mn-ionok hozzáadásával, a dNTP koncentrációjának megváltoztatásával a rendszerben stb., hogy véletlenszerűen mutációkat vezessenek be a célgénbe egy bizonyos gyakorisággal egy mutációs könyvtár létrehozásához, majd a szükséges mutánsok kiválasztásával vagy szűrésével.
8. Folyamatos hibalehetőségű PCR: Az egyik PCR-amplifikációból kapott mutáns gének felhasználása a következő PCR-amplifikáció sablonjaként, és a véletlenszerű mutagenezis folyamatos és ismételt végrehajtása, így a kis mutációk minden egyes alkalommal felhalmozódnak, és fontos szándékos mutációkat hoznak létre.
9. DNS-átrendeződés: A különböző génekben kapott pozitív mutációk kombinálása egy új mutációs génállomány kialakításához, amelyet szexuális PCR-nek is neveznek.
10. A DNS újraszerveződésének működése: A pozitív mutációjú génkészletből izolált DNS-töredékeket véletlenszerűen vágják a dezoxiribonukleáz Ⅰ segítségével, hogy véletlenszerű fragmentumokat kapjanak, több PCR-ciklus után primerek nélkül, a PCR-ciklus során a véletlenszerű fragmentumokat egymás sablonjaiként és primerként használják az amplifikációhoz, amíg a teljes hosszúságú géneket nem kapják, ami a különböző génekből származó fragmentumok közötti rekombinációhoz és a szülőkben lévő szándékos mutációk rekombinációjához vezet. Vállalja a rekombinációt.

11. A szakaszos kiterjesztés módszere: A PCR-reakcióban a hagyományos lágyítás és hosszabbítás egy lépésben egyesül, és a reakcióidő jelentősen lerövidül, így csak egy nagyon rövid nazcens lánc szintetizálható. A denaturált nazcens láncot ezután primerként használjuk a rendszerben egyidejűleg jelen lévő különböző templátokkal történő lágyításhoz, miközben a hosszabbítás folytatódik. Ez a folyamat addig ismétlődik, amíg egy teljes hosszúságú génfragmentum nem keletkezik, ami egymástól távol eső, különböző templát-szekvenciákat tartalmazó nazcens DNS-molekulákat eredményez. Az ilyen naszcens DNS-molekulák nagyszámú mutáció-kombinációt tartalmaznak, amelyek elősegítik az új enzimtulajdonságok létrehozását.
12. Génkönyvtár: egy szervezet genomiális DNS-ét restrikciós endonukleázzal részben emésztett, az enzimszakasz beillesztésre kerül a hordozó DNS-molekulákba, a hordozó molekulagyűjtemény genomiális DNS-töredékeibe beillesztett összes hordozó molekula tartalmazza az adott szervezet teljes genomját, amely egyben a szervezet génkönyvtárát is képezi.
13. A könyvtár reprezentativitása: a könyvtárban található DNS-molekulák képesek-e teljes mértékben tükrözni az exogén gének összes lehetséges változását és módosulását, ami a könyvtár minőségének legfontosabb mutatója. A könyvtár minőségének legfontosabb mutatója. A könyvtár reprezentativitásának mutatója a könyvtár könyvtári kapacitása.
14. Könyvtárkapacitás: az eredeti mutációs könyvtárban található független rekombináns klónok száma.
15. Vektorok mutációs könyvtár építéséhez: (λ-fág vektorrendszer) (plazmid vektorrendszer) (emlőssejt-expressziós vektorrendszer).
16. Enzim mimikri: Más néven mesterséges enzim vagy enzimmodell, olyan alkalmazott tudomány, amely molekuláris szinten utánozza az enzim aktív helyének alakját és méretét, mikrokörnyezetét és egyéb szerkezeti jellemzőit, valamint az enzim hatásmechanizmusát és sztereokémiáját.
17. Az enzimmodell (katalitikus csoportjának) és (szubsztrátjának) sztereokémiai jellemzőinek meg kell egyezniük, ami igen fontos a jó reakcióspecifikusság és katalitikus hatékonyság kialakításához.
18. "Tárgy-vendég" kémia: A kémia azon területét, ahol az alany (enzim) és a vendég (szubsztrát) ligandum és egyéb másodlagos kötések révén stabil komplexeket képez, "alany-vendég" kémiának nevezik.
19. A szimulált enzimek osztályozása: a) típus szerint: 1) egyszerű enzimmodellek; 2) mechanisztikus enzimmodellek; 3) egyszerű szintetikus enzimszerű vegyületek; b) tulajdonságok szerint: 1) alany-vendég enzimmodellek; 2) micelláris enzimmodellek; 3) peptidázok; 4) félszintetikus enzimek; 5) molekulárisan lenyomott enzimek; 6) antitest enzimek.
20. Antitest enzim: az antitest nagy szelektivitásának és az enzim nagy hatékonyságú katalitikus képességének terméke, a lényeg a katalitikus képességgel rendelkező immunglobulinok egy osztálya, más néven katalitikus antitest, specificitása meghaladja az enzim reakció specifitásának katalitikus sebességét, és néhányuk elérheti az enzim katalitikus sebességét is.
21. Molekuláris lenyomatképzés: egy vegyületre szelektív polimer előállításának folyamata, a vegyületet lenyomatképző molekulának, más néven templátmolekulának nevezik.
22. A molekuláris imprinting elve (a molekuláris imprinting előkészítési módszere): 1) válassza ki a funkcionális monomer az imprintelt molekula, úgy, hogy a kettő van egy kiegészítő reakció; 2) a lenyomott molekula -- monomer komplexek körül a polimerizációs reakció; 3) távolítsa el a lenyomott molekula a polimer extrakcióval; 4) a kialakulása egy polimer megtartott belül a lenyomott molekula a pontosan azonos alakú, méretű az üreg, a polimer lehet nagy szelektív újra kötődnek a lenyomott molekulák nagy szelektivitás.
23. A felületi molekuláris lenyomatok típusai: 1) molekuláris lenyomatok a hordozóként szolgáló szervetlen anyagok felületén; 2) szilárd anyagok felületmódosítása; 3) fehérje felületi lenyomatok.
24. Bio-imprinting: egyfajta molekuláris imprinting, utal a természetes biológiai anyagok (például fehérjék és szacharidok), mint a váz, amelyen a molekuláris imprinting, és a folyamat létrehozása a lenyomat molekulák specifikus felismerése az üreg.
25. A bioimprinting elve: a biomolekulák konformációjának rugalmassága a vízmentes szerves fázisban megszűnik, és konformációjuk rögzül, így a vizes oldatban a templátmolekula és a biomolekula közötti kölcsönhatás által létrehozott konformációs változások csak akkor maradhatnak meg, ha a vízmentes szerves fázisba kerülnek.
26. Fehérjék átalakítása félszintetikus enzimekké bioimprintinggel: 1) A fehérje részleges denaturálása a kiindulási fehérje konformációjának megzavarása érdekében; 2) A lenyomatmolekula hozzáadása úgy, hogy a lenyomatmolekula teljes mértékben kötődjön a részlegesen deformált fehérjéhez; 3) A lenyomatmolekula és a fehérje kölcsönhatása után a lenyomatmolekula keresztkötése keresztkötő anyaggal; 4) A lenyomatmolekula eltávolítása dialízissel.

Lépjen kapcsolatba velünk most!

Ha szüksége van Price-ra, kérjük, töltse ki elérhetőségét az alábbi űrlapon, általában 24 órán belül felvesszük Önnel a kapcsolatot. Ön is küldhet nekem e-mailt info@longchangchemical.com munkaidőben ( 8:30-18:00 UTC+8 H.-Szombat ) vagy használja a weboldal élő chatjét, hogy azonnali választ kapjon.

Összetétel Glükoamiláz	9032-08-0
Pullulanase	9075-68-7
Xilanáz	37278-89-0
Celluláz	9012-54-8
Naringináz	9068-31-9
β-Amiláz	9000-91-3
Glükóz-oxidáz	9001-37-0
alfa-amiláz	9000-90-2
Pektináz	9032-75-1
Peroxidáz	9003-99-0
Lipáz	9001-62-1
Kataláz	9001-05-2
TANNASE	9025-71-2
Elasztáz	39445-21-1
Ureáz	9002-13-5
DEXTRANASE	9025-70-1
L-laktil-dehidrogenáz	9001-60-9
Dehidrogenáz malát	9001-64-3
Koleszterin-oxidáz	9028-76-6