Wat zijn de kenmerken en toepassingen van de verschillende enzymen van IVD-grondstoffen?

Polymerase Chain Reaction (PCR) is een moleculair biologische techniek die wordt gebruikt om specifieke DNA-fragmenten te amplificeren, wat wordt beschouwd als DNA-replicatie buiten het organisme, waarbij minieme hoeveelheden DNA-fragmenten zodanig worden geamplificeerd dat ze gemakkelijk kunnen worden geïdentificeerd en herkend.

Voor PCR-reacties spelen "enzymen" een cruciale rol en elk type "enzym" heeft een andere activiteit en functie. Welke soorten enzymen zijn er? En wat zijn de toepassingen op het gebied van IVD?

DNA-polymerase

Definitie: Het is een type enzym dat DNA als sjabloon gebruikt, repliceert van het 5-terminale naar het 3-terminale uiteinde van DNA en de polymerisatie van het substraat dNTP-moleculen katalyseert om dochter-DNA te vormen.

Belangrijkste activiteiten en rollen: katalyseren DNA-synthese. 1, polymerisatie. 2, 3, → 5, exonuclease activiteit - proofreading rol 3, 5, → 3, exonuclease activiteit - excisie reparatie rol 4, pyrofosfaat hydrolyse rol 5, pyrofosfaat uitwisseling.

Gebruikelijke DNA-polymerases voor IVD zijn onder andere: Taq hot-start enzym, dat een chemische modificatie gebruikt om de activiteit van het Taq enzym af te sluiten voordat het reactiesysteem tot 70°C wordt verhit, waardoor niet-specifieke amplificatie wordt geremd. High-fidelity DNA polymerase, dat een polymerisatiecentrum en een splitsingscentrum bevat, waarbij het polymerisatiecentrum een 5′-3′ polymeraseactiviteit heeft, verantwoordelijk voor polymerisatie; het splitsingscentrum heeft een 3′-5′ exonucleaseactiviteit (ook bekend als proofreadingactiviteit), verantwoordelijk voor het verwijderen van de ongepaarde nucleotiden. (ook bekend als proofreading-activiteit), die verantwoordelijk is voor de excisie van ongepaarde nucleotiden.

reverse transcriptase

Definitie: Een enzym dat RNA als sjabloon gebruikt en een enkele streng DNA synthetiseert die complementair is aan de RNA-sjabloon in de 5′-3′ richting.

Belangrijkste activiteiten en rollen: 1. RNA-gestuurde DNA-polymerase-activiteit. 2. RNase H-activiteit 3. DNA-gestuurde DNA-polymerase-activiteit.

Toepassing op het gebied van IVD: 1, omgekeerde transcriptie polymerasekettingreactie (RT-PCR) 2, cDNA bibliotheekconstructie 3, RNA sequencing 4, RT-qPCR , 2019 New Crown Nucleic Acid Detection geconfigureerd systeem reagentia, zal onvermijdelijk toetreden tot de reverse transcriptase. Dit komt omdat RNA-virussen moeten worden omgezet in DNA om PCR-reacties te kunnen uitvoeren.

RNA-polymerase

Definitie: een DNA- of RNA-keten als een template polymerase, omdat in de cel met de genetische informatie van DNA transcriptie, ook bekend als transcriptase.

Belangrijkste activiteiten en rollen: 1, met DNA als sjabloon; 2, katalyseert de synthese van nucleïnezuren door polymerisatiereacties; 3, zorgt ervoor dat nucleotiden 3,→5,-fosfodiesterbindingen vormen; 4, transcribeert de sjabloonsequentie in de 5′-3′ richting volgens het principe van basencomplementaire koppeling.

Gangbare RNA-polymerases op het gebied van IVD zijn onder andere T7 RNA-polymerase, dat specifiek het proces van RNA-vorming in de 5'→3′-richting katalyseert. Momenteel wordt in de in-vitro diagnostiek de SAT-technologie gebruikt voor de toepassing van T7 RNA-polymerase voor RNA-amplificatie. Deze technologie is op grote schaal gebruikt voor het opsporen van pathogenen, het screenen van bloedvirussen en het opsporen van microbiële stoffen in het milieu.

Proteïnase K

Definitie: Proteïnase K is een krachtig proteolytisch enzym geïsoleerd uit Candida albicans en is een belangrijk reagens voor DNA-extractie.

Belangrijkste functie: membraaneiwitten en DNA-gebonden eiwitten afbreken en het vrijmaken van DNA bevorderen. Toepassing op IVD-gebied: voor de isolatie en extractie van plasmide, genomisch DNA, RNA. Bij virale nucleïnezuurdetectie kan proteinase K virale capsideproteïnen splijten en inactiveren, terwijl het virale genoom vrijkomt om de extractie van nucleïnezuur te voltooien.

UDG-enzym

Definitie: alias uracil-DNA-glycosylase ook bekend als uracil -N- glycosylase of UNGase. Het is de chemische structuur die DNA- en RNA-monomeren vormt en genetische informatie codeert.

Functie: Efficiënte controle van resterende PCR-verontreiniging. Toepassing in IVD: PCR-reagentia voor klinische tests bevatten UDG-enzym om contaminatie te voorkomen.

Endonuclease

Definitie: een klasse enzymen die een specifieke nucleotidesequentie herkent en de fosfodiesterbinding tussen twee desoxyribonucleotiden op een specifieke plaats in elke keten splitst, restrictie-enzymen genoemd.

Rol: er zijn 3 types: type 1: zowel modificatie als herkenningssplitsing, de splitsingsplaats is ver weg van de herkenningssequentie. type 2: alleen herkenningssplitsing, de splitsingsplaats is de herkenningssequentie. type 3: zowel modificatie als herkenningssplitsing, de splitsingsplaats en de herkenningssequentie dichter bij elkaar.

Toepassingen op IVD-gebied: 1, genlokalisatie en genisolatie, 2, DNA-analyse van de moleculaire basissequentie, 3, genetische manipulatiebewerking, 4, de vorming van de DNA-fysische kaart.

Deconjugerend enzym

Definitie: de energie van ATP-hydrolyse gebruiken om de waterstofbruggen af te wikkelen die gevormd zijn door het koppelen van dubbelstrengs DNA-nucleotiden om enkelstrengs DNA te vormen.

Rol: speelt een rol in het katalyseren van de deconvolutie van DNA of RNA tijdens DNA- of RNA-replicatie.

Toepassing op het gebied van IVD: Isothermische amplificatietechnologie, waarbij gebruik wordt gemaakt van een door warmte gestabiliseerd deconjugerend enzym in plaats van het thermische denaturatieproces in qPCR, om de dubbele streng te ontrafelen en de amplificatie uit te breiden. Deze techniek is minder gevoelig voor niet-specifieke amplificatie en vermijdt ook het proces van verhogen en verlagen van de temperatuur in de PCR-cyclus.

Wijzigend enzym

Definitie: Een enzym dat de opname van zeldzame basen in RNA of DNA katalyseert, of de oorspronkelijke basen wijzigt om vernietiging door restrictie-endonucleasen te voorkomen.

Rol: Covalente modificatie van de structuur van andere enzymen zodat ze in elkaar overgaan tussen een zeer actieve vorm en een relatief minder actieve vorm.

Toepassing in IVD: 5mC/m6A nucleïnezuurmodificerende enzymactiviteitstest HTMR-methode biedt sterke aanwijzingen voor de ontdekking en activiteitsevaluatie van kleine molecuulmodulatoren gericht op DNA/RNA-methylering.

Pyrofosfatase

DEFINITIE: Een enzym dat de omzetting van één molecuul pyrofosfaat naar twee moleculen fosfaationen katalyseert.

Functie: Hittestabiele anorganische pyrofosfatase is nog steeds 100% actief bij verhitting bij 100°C gedurende 4 uur, dus het kan worden gebruikt in PCR-reacties om de remming van PCR door het gegenereerde anorganische pyrofosfaat op te heffen en de DNA-replicatie te verbeteren.

antilichaam tegen taq

Definitie: Antilichaam tegen Taq DNA polymerase.

Functie: Tijdens PCR amplificatie bindt Taq Antilichaam aan Taq enzym om DNA polymerase activiteit te remmen vóór denaturatie bij hoge temperatuur, en kan effectief niet-specifiek annealing van primers en niet-specifieke amplificatie veroorzaakt door primer dimeer bij lage temperatuur remmen.

Toepassing in IVD: De hoge insluitingsefficiëntie van Taq-antilichaam kan de detectiegevoeligheid van de nieuwe coronavirus-nucleïnezuurdetectiekit verbeteren en de nieuwe coronavirusdetectie helpen.

Het standaard PCR-proces is verdeeld in drie stappen: DNA denaturatie, annealing en extensie. De inactiveringsreactie kan plaatsvinden aan het begin van de PCR door opwarming tot 50°C gedurende 10 minuten of tot 95°C gedurende 2 minuten, en het UDG-enzym elimineert de amplificatie die wordt gegenereerd door het verontreinigende DNA in het reactiesysteem. Vervolgens wordt het sjabloon-DNA bij hoge temperatuur gedenatureerd tot enkelstrengs-DNA. Twee primers worden respectievelijk met twee DNA-sjabloonstrengen verbonden onder invloed van DNA-polymerase en een geschikte temperatuur. Het Taq-antilichaam bindt aan het Taq-enzym om de activiteit van het DNA-polymerase te remmen en niet-specifieke amplificatie bij lage temperaturen te voorkomen. Toevoeging van anorganische pyrofosfatase aan de PCR-reactie hydrolyseert pyrofosfaat tot orthofosfaat, waardoor de amplificatie-efficiëntie van de reactie toeneemt.

In 2020 is door de enorme vraag naar nucleïnezuurtests de marktvraag naar moleculair diagnostische reagentia dramatisch gestegen en als gevolg daarvan heeft de industrie voor grondstoffenzymen zich snel ontwikkeld. In termen van productie, als gevolg van de hoge technische drempel van moleculaire testen grondstof enzym productie, de huidige binnenlandse markt is voornamelijk afhankelijk van de invoer. In de afgelopen jaren, samen met de opkomst van het binnenlandse productieproces, een aantal grondstoffen ondernemingen vermeld, productcategorieën worden ook geleidelijk verrijkt, maar het valt niet te ontkennen dat de binnenlandse IVD grondstoffen industrie is nog steeds in de vroege stadia van ontwikkeling, het marktaandeel is ook relatief klein, de toekomst is gebonden aan een grotere ruimte voor verbetering te bestaan.

Neem nu contact met ons op!

Als je Price nodig hebt, vul dan je contactgegevens in op het formulier hieronder. We nemen dan meestal binnen 24 uur contact met je op. Je kunt me ook een e-mail sturen info@longchangchemical.com tijdens kantooruren (8:30 tot 18:00 UTC+8 ma. ~ za.) of gebruik de live chat op de website voor een snel antwoord.

Samenstelling Glucoamylase	9032-08-0
Pullulanase	9075-68-7
Xylanase	37278-89-0
Cellulase	9012-54-8
Naringinase	9068-31-9
β-amylase	9000-91-3
Glucose-oxidase	9001-37-0
alfa-amylase	9000-90-2
Pectinase	9032-75-1
Peroxidase	9003-99-0
Lipase	9001-62-1
Katalase	9001-05-2
TANNASE	9025-71-2
Elastase	39445-21-1
Urease	9002-13-5
DEXTRANASE	9025-70-1
L-Lactische dehydrogenase	9001-60-9
Dehydrogenase malaat	9001-64-3
Cholesteroloxidase	9028-76-6