Apa saja karakteristik dan aplikasi dari berbagai enzim bahan baku IVD?

Polymerase Chain Reaction (PCR) adalah teknik biologi molekuler yang digunakan untuk mengamplifikasi fragmen DNA tertentu, yang dianggap sebagai replikasi DNA di luar organisme, di mana sejumlah kecil fragmen DNA diamplifikasi sedemikian rupa sehingga dapat dengan mudah diidentifikasi dan dikenali.

Untuk reaksi PCR, "enzim" memainkan peran penting, dan setiap jenis "enzim" memiliki aktivitas dan fungsi yang berbeda. Jadi, jenis enzim apa saja yang ada? Dan apa saja aplikasinya dalam bidang IVD?

Polimerase DNA

Definisi: Ini adalah jenis enzim yang menggunakan DNA sebagai templat, bereplikasi dari ujung 5 terminal ke ujung 3 terminal DNA, dan mengkatalisis polimerisasi molekul dNTP substrat untuk membentuk DNA anak.

Aktivitas dan peran utama: mengkatalisis sintesis DNA. 1, polimerisasi. 2, 3, → 5, aktivitas eksonuklease - peran pengoreksian 3, 5, → 3, aktivitas eksonuklease - peran perbaikan eksisi 4, peran hidrolisis pirofosfat 5, pertukaran pirofosfat.

Polimerase DNA yang umum di bidang IVD meliputi: Enzim Taq hot-start, yang menggunakan modifikasi kimiawi untuk menutup aktivitas enzim Taq sebelum sistem reaksi dipanaskan hingga 70°C, sehingga menghambat amplifikasi non-spesifik. Polimerase DNA dengan ketelitian tinggi, mengandung pusat polimerisasi dan pusat pembelahan, pusat polimerisasi memiliki aktivitas polimerase 5′-3′, yang bertanggung jawab untuk polimerisasi; pusat pembelahan memiliki aktivitas eksonuklease 3′-5′ (juga dikenal sebagai aktivitas pengoreksian), yang bertanggung jawab atas nukleotida yang tidak berpasangan untuk dipotong. (juga dikenal sebagai aktivitas pengoreksian), yang bertanggung jawab atas eksisi nukleotida yang tidak berpasangan.

membalikkan transkriptase

Definisi: Enzim yang menggunakan RNA sebagai templat dan mensintesis untai tunggal DNA yang komplementer dengan templat RNA dalam arah 5′-3′.

Aktivitas dan peran utama: 1. Aktivitas DNA polimerase yang diarahkan oleh RNA. 2. Aktivitas RNase H 3. Aktivitas DNA polimerase yang diarahkan oleh DNA.

Aplikasi di bidang IVD: 1, reaksi berantai polimerase transkripsi terbalik (RT-PCR) 2, konstruksi perpustakaan cDNA 3, pengurutan RNA 4, RT-qPCR, reagen sistem yang dikonfigurasi Deteksi Asam Nukleat Mahkota Baru, pasti akan bergabung dengan transkripase balik. Ini karena virus RNA harus ditranskripsi terbalik ke DNA untuk melakukan reaksi PCR.

Polimerase RNA

Definisi: Rantai DNA atau RNA sebagai template polimerase, karena di dalam sel terdapat informasi genetik transkripsi DNA, juga dikenal sebagai transkriptase.

Aktivitas dan peran utama: 1, dengan DNA sebagai templat; 2, mengkatalisis sintesis asam nukleat melalui reaksi polimerisasi; 3, menyebabkan nukleotida membentuk ikatan 3,→5,-fosfodiester; 4, mentranskripsi urutan templat ke arah 5′-3′ sesuai dengan prinsip pasangan komplementer basa.

Polimerase RNA yang umum di bidang IVD termasuk polimerase RNA T7, yang secara khusus mengkatalisis proses pembentukan RNA dalam arah 5'→3′. Saat ini dalam diagnostik in vitro, teknologi SAT adalah aplikasi T7 RNA polimerase untuk amplifikasi RNA. Teknologi ini telah banyak digunakan dalam deteksi patogen, skrining virus darah, dan deteksi mikroba lingkungan.

Proteinase K

Definisi: Proteinase K adalah enzim proteolitik kuat yang diisolasi dari Candida albicans dan merupakan pereaksi utama untuk ekstraksi DNA.

Fungsi utama: untuk mendegradasi protein membran dan protein yang terikat DNA, dan mendorong pembebasan DNA. Aplikasi di bidang IVD: untuk isolasi dan ekstraksi plasmid, DNA genom, RNA. Dalam deteksi asam nukleat virus, proteinase K dapat membelah dan menonaktifkan protein kapsid virus, sambil melepaskan genom virus untuk menyelesaikan ekstraksi asam nukleat.

Enzim UDG

Definisi: alias urasil-DNA glikosilase juga dikenal sebagai urasil -N- glikosilase atau UNGase. Ini adalah struktur kimia yang membentuk monomer DNA dan RNA dan mengkodekan informasi genetik.

Fungsi: Kontrol yang efisien terhadap kontaminasi sisa PCR. Aplikasi dalam IVD: Reagen PCR untuk tes klinis mengandung enzim UDG untuk mencegah kontaminasi.

Endonuklease

Definisi: kelas enzim yang mengenali urutan nukleotida tertentu dan membelah ikatan fosfodiester antara dua deoksiribonukleotida di tempat tertentu dalam setiap rantai, disebut sebagai enzim restriksi.

Peran: ada 3 jenis: tipe 1: pembelahan modifikasi dan pengenalan, lokasi pembelahan jauh dari urutan pengenalan. tipe 2: hanya pembelahan pengenalan, lokasi pembelahan adalah urutan pengenalan. tipe 3: pembelahan modifikasi dan pengenalan, lokasi pembelahan dan urutan pengenalan lebih dekat.

Aplikasi di bidang IVD: 1, lokalisasi gen dan isolasi gen, 2, analisis urutan basa molekuler DNA, 3, pengeditan rekayasa genetika, 4, pembentukan peta fisik DNA.

Enzim dekonjugasi

Definisi: menggunakan energi yang disediakan oleh hidrolisis ATP untuk melepaskan ikatan hidrogen yang dibentuk oleh pasangan nukleotida DNA untai ganda untuk membentuk DNA untai tunggal.

Peran: berperan dalam mengkatalisis dekonvolusi DNA atau RNA selama replikasi DNA atau RNA.

Aplikasi di bidang IVD: Teknologi amplifikasi isotermal, menggunakan enzim dekonjugasi yang distabilkan dengan panas alih-alih proses denaturasi termal dalam qPCR, untuk mengurai untai ganda dan memperpanjang amplifikasi. Teknik ini tidak terlalu rentan terhadap amplifikasi non-spesifik, dan juga menghindari proses menaikkan dan menurunkan suhu dalam siklus PCR, dan hanya memerlukan peralatan sederhana untuk pendeteksian.

Memodifikasi Enzim

Definisi: Enzim yang mengkatalisis penggabungan basa langka ke dalam RNA atau DNA, atau memodifikasi basa asli untuk mencegah penghancuran oleh endonuklease restriksi.

Peran: Modifikasi kovalen dari struktur enzim lain sehingga berubah menjadi satu sama lain antara bentuk yang sangat aktif dan bentuk yang relatif kurang aktif.

Aplikasi dalam IVD: Metode uji aktivitas enzim pengubah asam nukleat 5mC/m6A Metode HTMR memberikan bukti kuat untuk penemuan dan evaluasi aktivitas modulator molekul kecil yang menargetkan metilasi DNA/RNA.

Pirofosfatase

DEFINISI: Enzim yang mengkatalisis konversi satu molekul pirofosfat menjadi dua molekul ion fosfat.

Fungsi: Pirofosfatase anorganik yang stabil terhadap panas masih aktif 100% saat dipanaskan pada suhu 100°C selama 4 jam, sehingga dapat digunakan dalam reaksi PCR untuk mengangkat penghambatan PCR oleh pirofosfat anorganik yang dihasilkan dan meningkatkan replikasi DNA.

antibodi taq

Definisi: Antibodi terhadap Taq DNA polimerase.

Fungsi: Selama amplifikasi PCR, Antibodi Taq berikatan dengan enzim Taq untuk menghambat aktivitas DNA polimerase sebelum denaturasi pada suhu tinggi, dan secara efektif dapat menghambat anil non-spesifik primer dan amplifikasi non-spesifik yang disebabkan oleh dimer primer pada suhu rendah.

Aplikasi dalam IVD: Efisiensi penahanan yang tinggi dari antibodi Taq dapat meningkatkan sensitivitas deteksi kit deteksi asam nukleat virus corona baru dan membantu deteksi virus corona baru.

Proses PCR standar dibagi menjadi tiga langkah: Denaturasi, annealing, dan ekstensi DNA. Reaksi inaktivasi dapat terjadi pada awal PCR dengan pemanasan hingga 50°C selama 10 menit atau 95°C selama 2 menit, dan enzim UDG menghilangkan amplifikasi yang dihasilkan oleh DNA yang terkontaminasi dalam sistem reaksi. Selanjutnya, DNA template didenaturasi menjadi DNA untai tunggal dengan suhu tinggi. dua primer dianil dengan dua untai DNA template masing-masing di bawah DNA polimerase dan suhu yang sesuai. Antibodi Taq berikatan dengan enzim Taq untuk menghambat aktivitas DNA polimerase dan menghambat amplifikasi non-spesifik pada suhu rendah. Penambahan pirofosfatase anorganik ke dalam reaksi PCR menghidrolisis pirofosfat menjadi ortofosfat, meningkatkan efisiensi amplifikasi reaksi.

Enzim bahan baku adalah rantai industri hulu industri pengujian molekuler Pada tahun 2020, di depan permintaan yang sangat besar untuk pengujian asam nukleat, permintaan pasar untuk reagen diagnostik molekuler meningkat secara dramatis, dan industri enzim bahan baku telah berkembang pesat sebagai hasilnya. Dalam hal produksi, karena ambang batas teknis yang tinggi dari produksi enzim bahan baku pengujian molekuler, pasar domestik saat ini terutama bergantung pada impor. Dalam beberapa tahun terakhir, seiring dengan maraknya proses produksi dalam negeri, sejumlah perusahaan bahan baku yang terdaftar, kategori produk juga secara bertahap diperkaya, namun tidak dapat dipungkiri bahwa industri bahan baku IVD dalam negeri masih dalam tahap awal pengembangan, pangsa pasar juga relatif kecil, masa depan pasti akan ada ruang yang lebih besar untuk perbaikan.

Hubungi Kami Sekarang!

Jika Anda membutuhkan Harga, silakan isi informasi kontak Anda di formulir di bawah ini, kami biasanya akan menghubungi Anda dalam waktu 24 jam. Anda juga bisa mengirim email kepada saya info@longchangchemical.com selama jam kerja (8:30 pagi hingga 6:00 sore UTC+8 Senin-Sabtu) atau gunakan obrolan langsung situs web untuk mendapatkan balasan secepatnya.

Senyawa Glukoamilase	9032-08-0
Pullulanase	9075-68-7
Xilanase	37278-89-0
Selulase	9012-54-8
Naringinase	9068-31-9
β-Amilase	9000-91-3
Glukosa oksidase	9001-37-0
alfa-Amilase	9000-90-2
Pektinase	9032-75-1
Peroksidase	9003-99-0
Lipase	9001-62-1
Katalase	9001-05-2
TANNASE	9025-71-2
Elastase	39445-21-1
Urease	9002-13-5
DEXTRANASE	9025-70-1
L-Laktat dehidrogenase	9001-60-9
Dehidrogenase malat	9001-64-3
Kolesterol oksidase	9028-76-6