Apa yang menjadi fokus rekayasa protein dan enzim?
1. Rekayasa protein: berdasarkan studi tentang hubungan antara struktur dan fungsi protein, penggunaan teknologi rekayasa genetika atau teknologi modifikasi kimia untuk mengubah protein yang ada menjadi protein baru bioteknologi modern.
2. Rekayasa enzim: penggunaan enzim, organel, atau fungsi katalitik spesifik sel, melalui reaktor yang sesuai untuk memproduksi produk manusia secara industri atau untuk mencapai tujuan tertentu dalam ilmu pengetahuan teknik.
3. Konten utama penelitian rekayasa enzim:
1) rekayasa enzim kimia
(2) rekayasa enzim biologis
(3) Enzim dan sel yang tidak bergerak
(4) Reaktor dan sensor enzim
5) Katalisis fase non-air dari enzim
4. Fusi protein: rekombinasi bagian dari gen yang mengkode satu protein dengan gen protein lain, atau kombinasi fragmen gen protein yang berbeda untuk menghasilkan protein fusi baru melalui kloning dan ekspresi gen.
5. Peran fusi protein:
1) Untuk isolasi dan pemurnian produk ekspresi;
2) Untuk meningkatkan kelarutan produk ekspresi;
3) untuk meningkatkan stabilitas protein.
6. Kristalografi protein: rekayasa studi struktural makromolekul biologis menggunakan teknologi difraksi sinar-X, bagian penting dari biologi struktural.
8. Mutasi yang ditargetkan: urutan nukleotida lokal dari gen tertentu diubah dengan cara yang ditargetkan melalui kloning molekuler, yang biasanya digunakan untuk mempelajari struktur fungsional protein serta untuk modifikasi protein target.
10. Ruang lingkup penelitian rekayasa enzim:
1) Pengembangan dan produksi berbagai jenis enzim alami;
2) Teknik isolasi, pemurnian, dan identifikasi enzim;
3) Teknik imobilisasi;
4) Penyerbukan silang dengan menggunakan bidang bioteknologi lainnya;
5) pengembangan dan penerapan reaktor multi-enzim.
11. Stabilitas dan stabilisasi enzim:
(i) Penyebab inaktivasi enzim:
(1) Beberapa residu asam amino tertentu di pusat aktif enzim dimodifikasi secara kimiawi, sehingga aktivitas enzim hilang (mikroskopis);
(2) Pengaruh lingkungan eksternal, hambatan spasial di pusat aktif enzim, sehingga tidak dapat berikatan dengan substrat;
3) perubahan dalam struktur enzim yang lebih tinggi (perubahan heliks dan pelipatan);
4) kerusakan rantai polipeptida (sangat kuat);
(ii) Stabilisasi enzim:
(1) pengawetan suhu rendah (enzim itu sendiri tidak terdenaturasi, tidak mudah bagi enzim lain untuk mendegradasi protein target);
2) Penambahan garam (konsentrasi tinggi (NH4)2SO4);
3) Penambahan ligan seperti koenzim substrat;
4) Penambahan denaturant yang kuat (untuk melindungi struktur primer dan menghidupkannya kembali apabila digunakan);
5) kristalisasi.
12. Keunggulan mikroorganisme sebagai sumber enzim:
1) Akses mudah ke enzim yang dibutuhkan untuk enzim;
2) akses mudah ke galur-galur unggul;
3) siklus produksi yang pendek;
4) biaya produksi yang rendah;
5) manajemen produksi yang mudah;
6) lebih banyak cara untuk meningkatkan produksi enzim mikroba.
13. Enzim yang tidak dapat bergerak: Ini mengacu pada enzim yang ada di ruang tertentu dalam keadaan tersumbat, yang dapat terus menerus melakukan reaksi, dan enzim dapat didaur ulang dan digunakan kembali setelah reaksi.
14. Keuntungan dari enzim yang diimobilisasi:
1) Sangat mudah untuk memisahkan enzim yang tidak bergerak dari produk dan substrat;
2) Dapat melakukan reaksi batch berulang dan kolom yang dimuat dalam reaksi kontinu dalam jangka waktu yang lama;
3) kemampuan untuk meningkatkan stabilitas enzim dalam banyak kasus;
4) Proses reaksi enzim dapat dikontrol secara ketat;
(5) Tidak ada residu enzim dalam larutan produk, menyederhanakan proses pemurnian;
6) Lebih cocok untuk reaksi multi-enzim daripada enzim bebas;
7) Hasil produk dapat ditingkatkan dan kualitas produk dapat ditingkatkan;
8) efisiensi penggunaan enzim meningkat dan biaya berkurang.
15. Kerugian dari enzim yang tidak bergerak:
1) Hilangnya aktivitas enzim saat tidak bergerak;
2) Peningkatan biaya produksi dan investasi awal yang besar di pabrik;
3) hanya dapat digunakan untuk substrat yang dapat larut dan lebih cocok untuk substrat molekul kecil;
4) Tidak cocok untuk reaksi multi-enzim dibandingkan dengan bakteriofag utuh, terutama yang membutuhkan kofaktor;
5) prosedur pemisahan yang harus dijalani oleh enzim intraseluler.
16. Prinsip-prinsip persiapan enzim yang diimobilisasi:
1) Perhatian harus diberikan untuk menjaga aktivitas katalitik dan spesifisitas enzim;
2) Imobilisasi harus kondusif untuk otomatisasi dan kontinuitas produksi;
(3) Enzim yang diimobilisasi harus memiliki resistensi situs spasial terkecil, sejauh mungkin tidak menghalangi kedekatan batubara dan substrat, untuk meningkatkan hasil produk;
4) Enzim dan pembawa harus memiliki daya ikat yang kuat sehingga enzim yang diimobilisasi dapat diperoleh kembali dan penyimpanannya memudahkan penggunaan berulang;
(5) Enzim yang diimobilisasi harus memiliki stabilitas maksimum, dan pembawa yang dipilih tidak boleh bereaksi secara kimiawi dengan produk limbah atau larutan reaksi;
(6) biaya enzim yang tidak bergerak harus rendah, kondusif untuk penggunaan industri.
17. Metode imobilisasi enzim:
(i) Metode pengikatan non-kovalen:
(1) metode kristalisasi: berlaku untuk enzim dengan aktivitas enzim rendah, konsentrasi berubah setelah kristalisasi, dan tidak ada kerugian dalam penggunaan terus menerus yang konstan;
(2) metode penguraian: enzim dibuat menjadi bubuk kering, yang terdispersi dalam fase tidak larut dalam air, bahkan jika bubuk kering tersuspensi dalam pelarut, keuntungan: pemulihan lebih mudah, kerugian: bubuk kering mudah menyerap air, partikel menjadi lebih besar, aktivitasnya berkurang, dan vitalitas enzim dalam pelarut organik akan terpengaruh;
(3) Adsorpsi fisik: metode di mana enzim secara fisik teradsorpsi pada pembawa yang tidak larut; Keuntungan: pusat aktif enzim tidak mudah dihancurkan, lebih sedikit perubahan struktur senior, lebih sedikit kehilangan aktivitas enzim, juga cocok untuk sel yang tidak dapat bergerak; Kerugian: interaksi yang lemah antara enzim dan pembawa, enzim mudah rontok;
(4) Mengikat pembawa yang larut dalam air melalui ikatan ionik; Keuntungan: operasi sederhana, kondisi ringan, struktur senior dan pusat aktif tidak dapat dihancurkan, juga berlaku untuk sel yang tidak dapat bergerak; Kerugian: pembawa dan kekuatan pengikatan enzim lebih lemah, penyangga anionik atau kationik, konsentrasi ionik pengaruhnya lebih besar, enzim lebih mudah jatuh dari pembawa;
(ii) Metode pengikatan kimiawi:
(1) metode pengikatan kovalen: pengikatan kovalen enzim dan pembawa; metode: aktivasi gen terkait pembawa, dan kemudian reaksi kopling dengan gen terkait enzim, dalam pengikatan pembawa relatif kuat, umumnya tidak akan tetap perubahan konsentrasi substrat dan perubahan; kerugian: kondisi reaksi lebih intens, sering menyebabkan perubahan struktur tingkat tinggi, penghancuran pusat aktif, hanya berlaku untuk imobilisasi enzim, tidak cocok untuk imobilisasi sel;
(2) Metode pengikatan silang: pada penggunaan reagen multifungsi atau reagen bifungsional, sehingga enzim dan enzim atau mikroorganisme dan metode imobilisasi pengikatan silang sel mikroba, umumnya dengan mengurangi konsentrasi zat pengikat silang dan waktu reaksi untuk mempertahankan aktivitas enzim;
(iii) Metode penyematan:
(1) tipe kisi: enzim atau mikroorganisme yang tertanam dalam kisi-kisi halus gel polimer, metode ini adalah imobilisasi sel mikroba dengan lebih banyak metode; Keuntungan: tidak perlu digabungkan dengan reaksi protein enzim, tingkat pemulihan aktivitas enzim tinggi;
(2) jenis mikrokapsul: molekul enzim dikemas dalam kapsul, membran polimer semi permeabel, kapsul ini kedap air dan dapat berada dalam beberapa fase organik anhidrat.
18. Sifat-sifat enzim yang diimobilisasi:
(i) Perubahan aktivitas enzim setelah imobilisasi:
Penyebab:
(1) Konformasi spasial molekul enzim berubah selama imobilisasi, bahkan mempengaruhi asam amino di pusat aktif;
Kebebasan spasial molekul enzim dibatasi setelah imobilisasi, yang secara langsung memengaruhi efek vakuola dari pusat aktif pada substrat;
Resistensi difusi internal membuat pendekatan molekul substrat ke pusat aktif tertahan;
Ketika tertanam, enzim dikelilingi oleh membran semipermeabel polimer, dan substrat makromolekul tidak dapat mendekati enzim melalui membran;
Pengaruh imobilisasi terhadap stabilitas enzim:
Stabilitas termal meningkat;
2) Peningkatan stabilitas terhadap berbagai reagen organik dan reagen enzim;
(3) Stabilitas terhadap nilai pH yang berbeda, stabilitas protease, stabilitas penyimpanan dan stabilitas operasional berdampak;
(4) Alasan peningkatan stabilitas enzim yang diimobilisasi: enzim yang diimobilisasi dan pembawa dapat dihubungkan di beberapa titik, yang dapat mencegah molekul protease meregang dan berubah bentuk; vitalitas enzim dapat dihilangkan setelah imobilisasi dan dilepaskan; degradasi diri enzim dapat dihambat;
(iii) Perubahan suhu optimal - meningkat;
(iv) Perubahan pH optimal: pelebaran rentang;
(v) Perubahan Km (perubahan konstanta Mie - menjadi lebih kecil, afinitas meningkat).
19. Metode imobilisasi:
1) Ko-imobilisasi koenzim dan enzim dalam pembawa yang sama menghasilkan sistem yang secara permanen bebas dari koenzim tambahan;
2) melumpuhkan koenzim secara langsung pada molekul enzim.
20. Imobilisasi sel: sel yang dibatasi pergerakan bebasnya, yaitu sel yang dibatasi secara fisik dan kimiawi atau dibatasi pada batas-batas spasial tertentu, tetapi sel masih mempertahankan aktivitas katalitik dan memiliki kelayakan untuk digunakan berulang kali dan terus menerus.
1. Keuntungan dan kerugian imobilisasi sel:
Keuntungan: 1) Sel yang diimobilisasi mempertahankan kondisi asli dan lingkungan alami sistem enzim intraseluler, dan dengan demikian lebih stabil;
Mempertahankan sistem multienzim asli di dalam sel, untuk keuntungan katalitik multi-langkah yang lebih jelas, tidak perlu regenerasi koenzim;
Keuntungan yang lebih jelas untuk fermentasi sel yang berkembang biak yang tidak dapat bergerak; kepadatan tinggi sel yang tidak dapat bergerak, dapat berkembang biak, memperpendek siklus produksi fermentasi; stabilitas fermentasi yang baik, dapat diulang untuk jangka waktu yang lebih lama untuk penggunaan terus menerus; kaldu fermentasi yang mengandung lebih sedikit organisme kondusif untuk isolasi dan pemurnian produk untuk meningkatkan kualitas produk;
Kekurangan: 1) Kehadiran beragam enzim dalam sel akan membentuk produk sampingan yang tidak diinginkan;
Kehadiran membran sel, dinding sel, dan juga pembawa dapat membentuk batasan difusi;
3) ukuran pori-pori yang dibentuk oleh pembawa mempengaruhi permeabilitas substrat polimer.
2. Modifikasi kimiawi: ketika struktur kovalen protein diubah oleh penyertaan atau penghilangan gen kimiawi, kami menyebut fenomena ini sebagai modifikasi kimiawi.
3. Faktor-faktor yang memengaruhi reaktivitas gugus fungsi protein: 1) polaritas daerah mikro: 2) efek ikatan hidrogen; 3) efek elektrostatik; 4) efek pemblokiran situs.
4. Hiper-reaktivitas tingkat fungsional protein enzim: mengacu pada gen rantai samping protein dan reagen individu dapat terjadi reaksi cepat.
5. Faktor-faktor yang memengaruhi hiperreaktivitas:
1) Perubahan nilai pK dari fungsi protein;
2) Reaktivitas yang lebih besar dari gugus fungsi protein;
3) Interaksi elektrostatik untuk menarik reagen dan mengarahkannya secara tepat;
4) Adaptasi stereokimia antara reagen dan daerah protein yang dekat dengan lokasi modifikasi.
6. penentu reaktivitas pengubah:
1) adsorpsi selektif;
2) Interaksi elektrostatis;
3) Faktor resistensi lokasi;
4) faktor katalitik:
5) polaritas zona mikro (polaritas lingkungan setempat).
7. Kontrol spesifisitas reaksi modifikasi:
(i) Pemilihan reagen:
(1) Ada beberapa kasus modifikasi asam amino:
a. Modifikasi semua gugus amino tanpa memodifikasi gen lain;
b. Modifikasi gugus amino alfa dengan modifikasi balik;
c. modifikasi asam amino dengan aktivitas katalitik; d. mengubah keadaan bermuatan dan kelarutan protein, mengubah keadaan bermuatan protein untuk memilih reagen yang dapat membawa muatan maksimum dalam kondisi netral, mengubah kelarutan protein yang reaksinya dilakukan dalam air, pilihan reagen kimia untuk yang larut dalam air; 3) penentuan kuantitatif produk reaksi; 4) pertimbangan ukuran reagen: pemilihan ukuran reagen lebih kecil untuk memfasilitasi modifikasi, tidak menyebabkan perubahan besar dalam konformasi protein;
Pemilihan kondisi reaksi:
Kondisi reaksi tidak akan menyebabkan denaturasi protein yang tidak dapat diubah;
Pilihan kondisi reaksi yang kondusif untuk modifikasi protein secara spesifik;
(iii) spesifisitas reaksi: 1) dapat menggunakan spesifisitas beberapa gen dalam protein; 2) memilih pH reaksi yang berbeda; 3) menggunakan beberapa ketidakstabilan produk; 4) pelabelan afinitas; 5) pelabelan diferensial: di dalam sistem terdapat molekul enzim, substrat, inhibitor; 6) menggunakan perbedaan keadaan protein.
8. Reagen afinitas: juga dikenal sebagai penghambat spesifik lokasi, reagen bekerja pada gen di lokasi yang sedang ditindaklanjuti, dan tidak berinteraksi dengan gen lain di luar lokasi yang sedang ditindaklanjuti, dan jenis pengubah ini disebut reagen afinitas.
9. Pelabelan afinitas: reagen afinitas umumnya memiliki struktur yang mirip dengan substrat, situs aktif enzim memiliki tingkat afinitas yang tinggi untuk situs aktif residu asam amino dapat diberi label secara kovalen, jenis modifikasi kimiawi dari spesifisitas pelabelan afinitas, juga dikenal sebagai spesifisitas penghambatan yang tidak dapat diubah.
10. Enzim yang tidak dapat bergerak: pada ruang tertentu, dalam keadaan tertutup, aksi terus menerus dapat terjadi, dan akhirnya didaur ulang.
11. bagaimana imobilisasi mempengaruhi stabilitas enzim melalui tiga efek berikut:
1) Menghasilkan hambatan spasial;
2) Menghasilkan pembatasan difusi;
3) keterikatan kovalen multipoint.
12. metode stabilisasi:
(i) imobilisasi (pengikatan kimiawi, metode penyematan, dll.): 1) menghasilkan hambatan spasial: menghambat inaktivasi kimiawi; 2) menghasilkan batasan difusi: menanamkan enzim di dalam partikel berpori, di mana substrat menyentuh permukaan partikel berpori sebelum berdifusi ke bagian dalam untuk berinteraksi dengan enzim, tanpa terkendali oleh konsentrasi substrat; 3) hubungan kovalen multipoint: menghubungkan enzim secara kovalen ke permukaan pembawa di beberapa titik, atau menghubungkan silang enzim dengan pereaksi bifungsional atau menurunkan enzim yang akan dienkapsulasi dalam pembawa. Pori-pori yang rapat dapat membuat konformasi enzim menjadi lebih padat, sehingga mencegah konformasi enzim dari keadaan melipat ke keadaan meregang secara berlebihan.
13. Ribonuklease: Ini adalah deskripsi RNA dengan aktivitas katalitik, yang sifat kimianya adalah asam ribonukleat memiliki fungsi katalitik enzim, dan substratnya dapat berupa molekul yang berbeda atau beberapa bagian dari molekul RNA yang sama.
14. Nuklease alami: (a) nuklease tipe geser (mengkatalisis pemotongan RNA sendiri dan heterogen, endonuklease asam nukleat): 1) nuklease martil; 2) nuklease jepit rambut; 3) enzim kompleks protein-RNA; (b) nuklease penyambungan: termasuk intron grup â… dan intron grup â…¡; untuk mencapai pemotongan RNA sendiri; dengan aktivitas endonuklease asam nukleat dan ligase.
15. Seleksi in vitro: dimulai dari perpustakaan molekul acak berkapasitas besar yang dibangun dari molekul RNA atau DNA yang disusun secara acak, di mana sejumlah kecil molekul dengan fungsi tertentu disaring.
16. Aptamer: Fragmen RNA atau DNA yang dapat mengikat secara spesifik dan efisien pada ligan seperti zat organik atau protein disebut aptamer RNA atau aptamer DNA.
17. Program penyaringan aptamer: 1) secara kimiawi mensintesis perpustakaan molekul DNA, dalam posisi pada rantai molekul untuk memperkenalkan urutan yang benar-benar acak atau bermutasi sebagian, ujung-ujung molekul adalah urutan tetap, untuk amplifikasi PCR; 2) setelah beberapa putaran amplifikasi PCR, transkripsi in vitro untuk membentuk perpustakaan RNA yang diurutkan secara acak; 3) molekul RNA ini melalui kombinasi kolom kromatografi afinitas molekul target, sesuai dengan ukuran kemampuan pengikatan molekul RNA dan target akan dibedakan, mengikat molekul RNA yang kuat akhirnya dielusi ke bawah; 4) molekul RNA yang dielusi setelah transkripsi balik, amplifikasi PCR, transkripsi, pada siklus penyaringan berikutnya, setelah 5 sampai 10 siklus, untuk mendapatkan perpustakaan yang diperkaya dengan molekul target dengan afinitas molekul RNA yang tinggi.
18. Proses penyaringan nuklease: 1) dengan mentranskripsi urutan acak RNA untuk membangun perpustakaan acak DNA; 2) perpustakaan acak dengan molekul aktivitas katalitik dapat mengkatalisis substrat dan melakukan ligasi kovalen; 3) produk reaksi melalui yang diimobilisasi dalam substrat RNA 5 'ujung pasangan komplementer berurutan kolom afinitas oligonukleotida, adsorpsi selektif dari perpustakaan acak yang dapat mengkatalisis molekul RNA dalam reaksi ligasi; 4) Setelah elusi garam tinggi: transkripsi terbalik, amplifikasi PCR, transkripsi, dan masuk ke putaran penyaringan berikutnya; 5) Dalam siklus penyaringan berikutnya, mutasi dimasukkan ke dalam molekul aktif pada frekuensi tertentu dengan PCR yang rentan terhadap kesalahan, yang meningkatkan poliselektivitas molekuler dari pustaka acak yang diperoleh dengan penyaringan; 6) Setelah beberapa putaran penyaringan, molekul RNA dengan aktivitas katalitik diperkaya, dan molekul yang relatif kurang aktif dihilangkan.
19. Deoksiribonuklease: fragmen DNA untai tunggal katalitik yang disintesis menggunakan teknik evolusi molekuler in vitro memiliki aktivitas katalitik yang efisien dan pengenalan struktur.
1. Metode seleksi in vitro: 1) mensintesis molekul DNA secara artifisial tanpa transkripsi dan transkripsi balik, dan mengamplifikasinya secara langsung dengan PCR; 2) mendapatkan molekul DNA untai tunggal: Amplifikasi PCR dilakukan dengan melampirkan biotin ke primer, dan melewatkan produk PCR melalui kolom afinitas protein biotin untuk pemisahan untaian positif dan negatif; 3) memperkenalkan ion logam divalen sebagai kofaktor; 4) memperkenalkan beberapa gugus fungsi tambahan ke dalam DNA untuk meningkatkan pengenalan struktur dan kemampuan pengenalan struktur deoksiribonuklease. gugus fungsi tambahan ke dalam DNA untuk meningkatkan afinitas struktural dan fungsional.
2. Klasifikasi deoksiribonuklease: (deoksiribonuklease yang membelah RNA) (deoksiribonuklease yang membelah DNA) (deoksiribonuklease dengan aktivitas kinase) (deoksiribonuklease dengan fungsi ligase) (mengkatalisis reaksi kelasi logam sikloheksil porfirin)
3. Asam nukleat antisense: molekul DNA atau RNA yang berikatan dengan molekul mRNA, membentuk penghalang situs spasial yang mencegahnya berikatan dengan ribosom dan dengan demikian menerjemahkannya menjadi protein di samping mendegradasi mRNA.
4. Desain molekul enzim yang rasional: studi tentang enzim alami atau yang benar-benar dapat berubah menggunakan berbagai metode biokimia, kristalografi, spektroskopi, dll. untuk mendapatkan karakteristik molekul enzim. Struktur spasial. Hubungan antara struktur dan fungsi, serta residu asam amino dan informasi lainnya, dan kemudian menggunakannya sebagai dasar untuk modifikasi enzim.
5. Desain molekul enzim yang tidak rasional: tanpa memerlukan informasi yang akurat tentang struktur molekul enzim, molekul enzim diubah dengan mutasi acak, rekombinasi genetik, skrining kosong, dan metode lainnya, dan enzim mutan dengan sifat yang diperlukan dipilih secara terarah.
6. Evolusi terarah dari molekul enzim: yaitu, arah pengembangan molekul enzim; dimulai dari satu atau lebih enzim induk yang sudah ada (alami atau diperoleh secara artifisial), untuk membangun perpustakaan enzim mutan buatan melalui mutasi atau rekombinasi gen, dan pada akhirnya memperoleh enzim evolusi dengan karakteristik tertentu yang menjadi ekspektasi utama melalui penyaringan. Evolusi terarah = mutasi acak + rekombinasi maju + seleksi (atau penyaringan).
7. PCR yang rentan terhadap kesalahan: Saat menggunakan enzim Taq untuk amplifikasi PCR gen target, frekuensi mutasi enzim Taq diubah dengan menyesuaikan kondisi reaksi, seperti meningkatkan konsentrasi Mg2+, menambahkan ion Mn, mengubah konsentrasi dNTP dalam sistem, dll., Untuk memperkenalkan mutasi secara acak pada gen target pada frekuensi tertentu untuk membuat pustaka mutasi, dan kemudian memilih atau menyaring mutan yang diperlukan.
8. PCR yang rentan terhadap kesalahan terus menerus: Gen yang bermutasi yang berguna diperoleh dari satu amplifikasi PCR sebagai templat untuk amplifikasi PCR berikutnya, dan melakukan mutagenesis acak secara terus menerus dan berulang-ulang, sehingga mutasi kecil setelah setiap kali akan terakumulasi dan menghasilkan mutasi penting yang disengaja.
9. Reorganisasi DNA: Menggabungkan mutasi positif yang telah diperoleh pada gen yang berbeda untuk membentuk kumpulan gen mutasi baru, yang juga dikenal sebagai PCR seksual.
10. Pengoperasian reorganisasi DNA: Fragmen DNA yang diisolasi dari kumpulan gen mutasi positif dipotong secara acak oleh deoksiribonuklease â… untuk mendapatkan fragmen acak, setelah beberapa siklus PCR tanpa primer, dalam proses siklus PCR, fragmen acak digunakan sebagai templat dan primer satu sama lain untuk amplifikasi, hingga gen panjang penuh diperoleh, yang mengarah pada rekombinasi antara fragmen dari gen yang berbeda, dan rekombinasi mutasi yang disengaja pada induknya. Melakukan rekombinasi.
Topik Penambangan dan Modifikasi Komponen Biologi Berbasis AI (20-22 September \ Jinan)
11. Metode ekstensi terhuyung-huyung: Dalam reaksi PCR, annealing dan ekstensi konvensional digabungkan menjadi satu langkah dan waktu reaksinya sangat dipersingkat sehingga hanya rantai baru lahir yang sangat pendek yang dapat disintesis. Rantai baru yang terdenaturasi kemudian digunakan sebagai primer untuk menganil dengan templat berbeda yang secara bersamaan hadir dalam sistem sementara ekstensi berlanjut. Proses ini diulangi sampai fragmen gen panjang penuh dihasilkan, yang menghasilkan molekul DNA yang baru lahir yang mengandung urutan templat yang berbeda. Molekul DNA yang baru lahir tersebut mengandung sejumlah besar kombinasi mutasi yang akan memfasilitasi pembentukan sifat enzim baru.
12. Perpustakaan gen: DNA genom suatu organisme dengan endonuklease restriksi yang dicerna sebagian, bagian enzim akan dimasukkan ke dalam molekul DNA pembawa, semua molekul pembawa yang dimasukkan ke dalam fragmen DNA genom dari koleksi molekul pembawa akan mengandung seluruh genom organisme ini, yang juga merupakan perpustakaan gen organisme.
13. Keterwakilan perpustakaan: ini mengacu pada apakah molekul DNA yang terkandung dalam perpustakaan dapat sepenuhnya mencerminkan semua kemungkinan perubahan dan perubahan gen eksogen, yang merupakan indikator terpenting dari kualitas perpustakaan. Ini adalah indikator terpenting dari kualitas perpustakaan. Indikator keterwakilan perpustakaan adalah kapasitas perpustakaan perpustakaan.
14. Kapasitas perpustakaan: mengacu pada jumlah klon rekombinan independen yang terkandung dalam perpustakaan mutasi asli yang dibangun.
15. Vektor untuk konstruksi pustaka mutasi: (sistem vektor fag λ) (sistem vektor plasmid) (sistem vektor ekspresi sel mamalia).
16. Mimikri enzim: Juga dikenal sebagai enzim buatan atau model enzim, ini adalah ilmu terapan yang meniru bentuk dan ukuran situs aktif enzim dan lingkungan mikro serta fitur struktural lainnya serta mekanisme kerja enzim dan stereokimia pada tingkat molekuler.
17. (Gugus katalis) dan (substrat) dari model enzim harus memiliki fitur stereokimia yang cocok satu sama lain, yang cukup penting untuk pembentukan kekhususan reaksi dan potensi katalitik yang baik.
18. Kimia "subjek-tamu": Bidang kimia di mana subjek (enzim) dan tamu (substrat) membentuk kompleks yang stabil melalui ligan dan ikatan sekunder lainnya disebut kimia "subjek-tamu".
19. Klasifikasi enzim yang disimulasikan: (a) menurut jenisnya: 1) model enzim sederhana; 2) model enzim mekanistik; 3) senyawa mirip enzim sintetis sederhana; (b) menurut sifat: 1) model enzim subjek-tamu; 2) model enzim misel; 3) peptidase; 4) enzim semi-sintetik; 5) enzim yang tercetak secara molekuler; 6) enzim antibodi.
20. Enzim antibodi: produk dari selektivitas antibodi yang tinggi dan kemampuan katalitik enzim yang efisien dan efisien, intinya adalah kelas imunoglobulin dengan kemampuan katalitik, juga dikenal sebagai antibodi katalitik, spesifisitasnya melebihi kecepatan katalitik spesifisitas reaksi enzim, dan beberapa di antaranya dapat mencapai kecepatan katalitik enzim juga.
21. Pencetakan molekul: proses pembuatan polimer yang selektif untuk suatu senyawa, senyawa tersebut disebut molekul tercetak, juga disebut molekul template.
22. Prinsip pencetakan molekul (metode persiapan pencetakan molekul): 1) pilih monomer fungsional dari molekul yang tercetak, sehingga keduanya memiliki reaksi yang saling melengkapi; 2) di dalam molekul yang tercetak - kompleks monomer di sekitar reaksi polimerisasi; 3) lepaskan molekul yang tercetak dari polimer dengan cara ekstraksi; 4) pembentukan polimer yang dipertahankan di dalam molekul yang tercetak dengan bentuk dan ukuran rongga yang sama persis, polimer dapat sangat selektif mengikat kembali molekul yang tercetak dengan selektivitas yang tinggi.
23. Jenis-jenis pencetakan molekul permukaan: 1) pencetakan molekul pada permukaan bahan anorganik sebagai pembawa; 2) modifikasi permukaan bahan padat; 3) pencetakan permukaan protein.
24. Bio-imprinting: semacam pencetakan molekuler, mengacu pada bahan biologis alami (seperti protein dan sakarida) sebagai kerangka, tempat pencetakan molekuler, dan proses menghasilkan molekul yang tercetak dengan pengenalan rongga yang spesifik.
25. Prinsip bioimprinting: fleksibilitas konformasi biomolekul dibatalkan dalam fase organik anhidrat, dan konformasinya tetap, sehingga perubahan konformasi yang dihasilkan oleh interaksi antara molekul template dan biomolekul dalam larutan berair hanya dapat dipertahankan ketika mereka dipindahkan ke dalam fase organik anhidrat.
26. Konversi protein menjadi enzim semi-sintetik dengan pencetakan hayati: 1) Denaturasi parsial protein untuk mengganggu konformasi protein awal; 2) Penambahan molekul tercetak sehingga molekul tercetak sepenuhnya terikat pada protein yang berubah bentuk sebagian; 3) Setelah interaksi molekul tercetak dengan protein, pengikatan silang protein tercetak dengan zat pengikat silang; 4) Penghapusan molekul tercetak dengan dialisis.
Hubungi Kami Sekarang!
Jika Anda membutuhkan Harga, silakan isi informasi kontak Anda di formulir di bawah ini, kami biasanya akan menghubungi Anda dalam waktu 24 jam. Anda juga bisa mengirim email kepada saya info@longchangchemical.com selama jam kerja (8:30 pagi hingga 6:00 sore UTC+8 Senin-Sabtu) atau gunakan obrolan langsung situs web untuk mendapatkan balasan secepatnya.
| Senyawa Glukoamilase | 9032-08-0 |
| Pullulanase | 9075-68-7 |
| Xilanase | 37278-89-0 |
| Selulase | 9012-54-8 |
| Naringinase | 9068-31-9 |
| β-Amilase | 9000-91-3 |
| Glukosa oksidase | 9001-37-0 |
| alfa-Amilase | 9000-90-2 |
| Pektinase | 9032-75-1 |
| Peroksidase | 9003-99-0 |
| Lipase | 9001-62-1 |
| Katalase | 9001-05-2 |
| TANNASE | 9025-71-2 |
| Elastase | 39445-21-1 |
| Urease | 9002-13-5 |
| DEXTRANASE | 9025-70-1 |
| L-Laktat dehidrogenase | 9001-60-9 |
| Dehidrogenase malat | 9001-64-3 |
| Kolesterol oksidase | 9028-76-6 |