Qual è l'obiettivo dell'ingegneria delle proteine e degli enzimi?

1. Ingegneria delle proteine: si basa sullo studio della relazione tra struttura e funzione delle proteine, sull'uso della tecnologia di ingegneria genetica o di modifica chimica per trasformare le proteine esistenti in nuove proteine della moderna biotecnologia.

2. Ingegneria enzimatica: l'uso di enzimi, organelli o funzioni catalitiche specifiche di una cellula, attraverso un reattore appropriato per la produzione industrializzata di prodotti umani o per raggiungere uno scopo particolare di una scienza tecnica.

3. Il contenuto principale della ricerca sull'ingegneria enzimatica:
1) ingegneria chimica degli enzimi
(2) ingegneria biologica degli enzimi
(3) Enzimi e cellule immobilizzate
(4) Reattori enzimatici e sensori
5) Catalisi degli enzimi in fase non acquosa

4. Fusione di proteine: ricombinazione di parte del gene che codifica una proteina con un altro gene proteico, o combinazione di frammenti di geni proteici diversi per produrre nuove proteine di fusione mediante clonazione ed espressione genica.

5. Il ruolo della fusione di proteine:
1) Per l'isolamento e la purificazione dei prodotti di espressione;
2) Migliorare la solubilità dei prodotti di espressione;
3) migliorare la stabilità delle proteine.

6. Cristallografia delle proteine: l'ingegneria degli studi strutturali delle macromolecole biologiche che utilizza la tecnologia della diffrazione dei raggi X, una parte importante della biologia strutturale.

8. mutazione mirata: la sequenza nucleotidica locale di un gene specifico viene alterata in modo mirato mediante clonazione molecolare, solitamente utilizzata per studiare la struttura funzionale delle proteine e per modificare le proteine bersaglio.

10. Ambito di ricerca dell'ingegneria enzimatica:

1) Sviluppo e produzione di vari tipi di enzimi naturali;

2) Isolamento e purificazione degli enzimi e tecniche di identificazione;

3) Tecniche di immobilizzazione;

4) Impollinazione incrociata con altri settori della biotecnologia;

5) sviluppo e applicazione di reattori multienzimatici.

11. Stabilità e stabilizzazione degli enzimi:

(i) Cause di inattivazione degli enzimi:

(1) Alcuni specifici residui aminoacidici nel centro attivo dell'enzima vengono modificati chimicamente, in modo da perdere l'attività enzimatica (microscopica);

(2) Influenza dell'ambiente esterno, barriere spaziali nel centro attivo dell'enzima, in modo che non possa legarsi al substrato;

3) cambiamenti nella struttura superiore dell'enzima (cambiamenti nell'elica e nel ripiegamento);

4) rottura della catena polipeptidica (molto forte);

(ii) Stabilizzazione dell'enzima:

(1) conservazione a bassa temperatura (l'enzima stesso non è denaturato, non è facile per altri enzimi degradare la proteina target);

2) Aggiunta di sali (alta concentrazione di (NH4)2SO4);

3) Aggiunta di ligandi come i coenzimi del substrato;

4) Aggiunta di forti denaturanti (per proteggere la struttura primaria e ravvivarla quando viene utilizzata);

5) cristallizzazione.

12. Superiorità dei microrganismi come fonti di enzimi:

1) Facile accesso agli enzimi necessari per gli enzimi;

2) facile accesso a ceppi ad alto rendimento;

3) ciclo di produzione breve;

4) bassi costi di produzione;

5) facilità di gestione della produzione;

6) ulteriori modi per migliorare la produzione di enzimi microbici.

13. Enzima immobilizzato: si riferisce all'enzima che esiste in un certo spazio in uno stato bloccato, in grado di svolgere continuamente la reazione; l'enzima può essere riciclato e riutilizzato dopo la reazione.

14. Vantaggi dell'enzima immobilizzato:

1) È estremamente facile separare l'enzima immobilizzato dal prodotto e dal substrato;

2) Può eseguire reazioni batch ripetute e colonne caricate in una reazione continua per un lungo periodo di tempo;

3) la capacità di aumentare la stabilità dell'enzima nella maggior parte dei casi;

4) il processo di reazione dell'enzima può essere strettamente controllato;

(5) Nessun residuo di enzima nella soluzione del prodotto, semplificando il processo di purificazione;

6) È più adatto alla reazione multienzimatica rispetto all'enzima libero;

7) È possibile aumentare la resa del prodotto e migliorarne la qualità;

8) l'efficienza dell'uso degli enzimi aumenta e i costi si riducono.

15. Svantaggi dell'enzima immobilizzato:

1) L'immobilizzazione comporta una perdita di attività enzimatica;

2) Aumento dei costi di produzione e ingenti investimenti iniziali nell'impianto;

3) può essere utilizzato solo per substrati solubili ed è più adatto per substrati di piccole molecole;

4) Non è adatto per le reazioni multienzimatiche rispetto ai batteriofagi intatti, soprattutto quelle che richiedono cofattori;

5) le procedure di separazione a cui devono essere sottoposti gli enzimi intracellulari.

16. Principi di preparazione degli enzimi immobilizzati:

1) Bisogna fare attenzione a mantenere l'attività catalitica e la specificità dell'enzima;

2) L'immobilizzazione deve favorire l'automazione e la continuità della produzione;

(3) L'enzima immobilizzato deve avere la minima resistenza spaziale del sito, per non ostacolare la vicinanza del carbone e del substrato, al fine di migliorare la resa del prodotto;

4) L'enzima e il carrier devono avere una forte forza di legame in modo che l'enzima immobilizzato possa essere recuperato e la conservazione faciliti l'uso ripetuto;

(5) L'enzima immobilizzato deve avere la massima stabilità e il vettore selezionato non deve reagire chimicamente con il prodotto di scarto o la soluzione di reazione;

(6) Il costo dell'enzima immobilizzato deve essere basso e favorire l'uso industriale.

17. Metodi di immobilizzazione degli enzimi:

(i) Metodo di legame non covalente:

(1) metodo di cristallizzazione: applicabile agli enzimi con bassa attività enzimatica, la concentrazione cambia dopo la cristallizzazione e non vi è perdita nell'uso costante e continuo;

(2) metodo di decomposizione: l'enzima viene trasformato in polvere secca, che si disperde nella fase insolubile in acqua, anche se la polvere secca è sospesa nel solvente; vantaggio: il recupero è più conveniente, svantaggio: la polvere secca è facile da assorbire acqua, le particelle diventano più grandi, l'attività si riduce e la vitalità dell'enzima nei solventi organici ne risente;

(3) Adsorbimento fisico: metodo in cui l'enzima viene fisicamente adsorbito su un vettore insolubile; vantaggio: il centro attivo dell'enzima non viene facilmente distrutto, minori cambiamenti nella struttura senior, minore perdita di attività enzimatica, adatto anche per le cellule immobilizzate; svantaggio: debole interazione tra l'enzima e il vettore, l'enzima è facile da staccare;

(4) Legarsi al vettore idrosolubile attraverso il legame ionico; vantaggi: funzionamento semplice, condizioni miti, la struttura senior e il centro attivo non possono essere distrutti, applicabile anche alle cellule immobilizzate; svantaggi: la forza di legame tra il vettore e l'enzima è più debole, il tampone anionico o cationico, la concentrazione ionica dell'influenza del maggiore, l'enzima è più incline a staccarsi dal vettore;

(ii) Metodo di legame chimico:

(1) metodo di legame covalente: l'enzima e il vettore si legano in modo covalente; metodo: l'attivazione del gene legato al vettore, e poi la reazione di accoppiamento con i geni legati all'enzima, nel legame del vettore è relativamente forte, in genere non sarà fissa la concentrazione di substrato cambia e cambia; svantaggi: le condizioni di reazione sono più intense, spesso portano a cambiamenti nella struttura di alto livello, la distruzione del centro attivo, è applicabile solo per l'immobilizzazione dell'enzima, non è adatto per l'immobilizzazione della cellula;

(2) Metodo di reticolazione: si utilizza un reagente multifunzionale o un reagente bifunzionale, in modo che l'enzima e l'enzima o i microrganismi e le cellule microbiche siano immobilizzati mediante reticolazione, generalmente riducendo la concentrazione dell'agente reticolante e il tempo di reazione per mantenere l'attività enzimatica;

(iii) Metodo di incorporazione:

(1) tipo a griglia: l'enzima o i microrganismi sono incorporati in una griglia fine di gel polimerico, questo metodo è l'immobilizzazione delle cellule microbiche con più metodi; vantaggi: non è necessario combinare con la reazione enzimatica la proteina, il tasso di recupero dell'attività enzimatica è elevato;

(2) tipo microcapsula: la molecola dell'enzima è incapsulata in una capsula, la membrana polimerica è semipermeabile, questa capsula è impermeabile e può esistere in una fase organica anidra.

18. Proprietà degli enzimi immobilizzati:

(i) Variazione dell'attività enzimatica dopo l'immobilizzazione:

Cause:
(1) La conformazione spaziale della molecola dell'enzima cambia durante l'immobilizzazione, influenzando anche gli amminoacidi del centro attivo;

La libertà spaziale della molecola dell'enzima è limitata dopo l'immobilizzazione, il che influisce direttamente sull'effetto vacuolare del centro attivo sul substrato;

La resistenza alla diffusione interna rende difficile l'avvicinamento delle molecole di substrato al centro attivo;

Quando è incorporato, l'enzima è circondato da una membrana polimerica semipermeabile e il substrato macromolecolare non può avvicinarsi all'enzima attraverso la membrana;

Effetto dell'immobilizzazione sulla stabilità dell'enzima:

La stabilità termica aumenta;

2) Maggiore stabilità ai vari reagenti organici e ai reagenti enzimatici;

(3) La stabilità a diversi valori di pH, la stabilità della proteasi, la stabilità allo stoccaggio e la stabilità operativa hanno un impatto;

(4) Le ragioni della maggiore stabilità dell'enzima immobilizzato: l'enzima immobilizzato e il vettore possono essere collegati in più punti, impedendo alla molecola di proteasi di allungarsi e deformarsi; la vitalità dell'enzima può essere alleggerita dopo l'immobilizzazione e rilasciata; l'autodegradazione dell'enzima può essere inibita;

(iii) La temperatura ottimale cambia -- aumenta;

(iv) Variazione ottimale del pH: ampliamento dell'intervallo;

(v) Variazione di Km (variazione della costante di Mie -- diventa più piccola, l'affinità aumenta).

19.Metodi di immobilizzazione:

1) La co-immobilizzazione di coenzima ed enzima nello stesso vettore dà luogo a un sistema permanentemente privo di coenzima aggiuntivo;

2) immobilizzare il coenzima direttamente sulla molecola dell'enzima.

20. immobilizzazione cellulare: cellule che sono limitate dal libero movimento, cioè le cellule sono fisicamente e chimicamente vincolate o limitate a certi confini spaziali, ma le cellule mantengono ancora l'attività catalitica e hanno la vitalità per essere usate ripetutamente e continuamente.

1. Vantaggi e svantaggi dell'immobilizzazione cellulare:

Vantaggi: 1) Le cellule immobilizzate mantengono lo stato originale e l'ambiente naturale del sistema enzimatico intracellulare e sono quindi più stabili;

Mantenere il sistema multienzimatico originale nella cellula, per il vantaggio catalitico multi-step è più evidente, non è necessario rigenerare il coenzima;

Vantaggi più evidenti per la fermentazione a cellule proliferanti immobilizzate; l'alta densità di cellule immobilizzate, in grado di proliferare, abbrevia il ciclo di produzione della fermentazione; la buona stabilità della fermentazione, che può essere ripetuta per un periodo di tempo più lungo per un uso continuo; il brodo di fermentazione contiene un minor numero di organismi è favorevole all'isolamento e alla purificazione del prodotto per migliorare la qualità del prodotto;

Svantaggi: 1) La presenza di una varietà di enzimi nella cellula forma sottoprodotti indesiderati;

La presenza di membrane cellulari, pareti cellulari e anche di vettori può costituire una limitazione alla diffusione;

3) la dimensione dei pori formati dal supporto influisce sulla permeabilità del substrato polimerico.

2. modificazione chimica: quando la struttura covalente di una proteina viene alterata dall'inclusione o dalla rimozione di un gene chimico, ci si riferisce a questo fenomeno come modificazione chimica.

3. Fattori che influenzano la reattività dei gruppi funzionali delle proteine: 1) polarità delle microregioni: 2) effetto del legame idrogeno; 3) effetto elettrostatico; 4) effetto di blocco del sito.

4. Iper-reattività a livello funzionale della proteina enzimatica: si riferisce a un gene della catena laterale della proteina e a singoli reagenti che possono provocare una reazione rapida.

5. Fattori che influenzano l'iperreattività:
1) Alterazione del valore pK della funzione proteica;
2) Maggiore reattività del gruppo funzionale della proteina;
3) Interazioni elettrostatiche per attrarre i reagenti e orientarli in modo appropriato;
4) adattamento stereochimico tra il reagente e la regione proteica vicina al sito di modificazione.

6. determinanti della reattività del modificatore:
1) adsorbimento selettivo;
2) Interazioni elettrostatiche;
3) Fattori di resistenza del sito;
4) fattori catalitici:
5) polarità della microzona (polarità dell'ambiente locale).

7. controllo della specificità della reazione di modifica:

(i) Selezione dei reagenti:

(1) Esistono diversi casi di modifica degli amminoacidi:

a. Modifica di tutti i gruppi amminici senza modificare altri geni;

b.Modifica del gruppo alfa-amminico mediante contro-modifica;

c. modifica degli amminoacidi con attività catalitica; d. modifica dello stato di carica e della solubilità delle proteine; per modificare lo stato di carica delle proteine si devono scegliere reagenti in grado di trasportare la carica massima in condizioni neutre; per modificare la solubilità delle proteine la reazione avviene in acqua, la scelta dei reagenti chimici per la solubilità in acqua; 3) determinazione quantitativa del prodotto di reazione; 4) considerazione della dimensione del reagente: la scelta della dimensione del reagente è più piccola per facilitare la modifica, per non causare grandi cambiamenti nella conformazione della proteina;

Selezione delle condizioni di reazione:

Le condizioni di reazione non devono causare la denaturazione irreversibile della proteina;

La scelta delle condizioni di reazione favorisce la modifica specifica delle proteine;

(iii) specificità della reazione: 1) può utilizzare la specificità di alcuni geni della proteina; 2) scegliere diversi pH di reazione; 3) utilizzare l'instabilità di alcuni prodotti; 4) etichettatura per affinità; 5) etichettatura differenziale: nel sistema esistono molecole di enzimi, substrati, inibitori; 6) utilizzare la differenza di stato della proteina.

8. Reagente di affinità: noto anche come inibitore sito-specifico, il reagente agisce su un gene nel sito su cui si agisce e non interagisce con altri geni al di fuori del sito su cui si agisce; questo tipo di modificatore è chiamato reagente di affinità.

Etichettatura di affinità: i reagenti di affinità hanno generalmente una struttura simile a quella del substrato, il sito attivo dell'enzima ha un alto grado di affinità per il sito attivo dei residui aminoacidici che possono essere etichettati covalentemente; questo tipo di modifica chimica della specificità dell'etichettatura di affinità, nota anche come specificità dell'inibizione irreversibile.

10. enzima immobilizzato: su un determinato spazio, in uno stato chiuso, può avvenire un'azione continua e infine riciclata.

11. Come l'immobilizzazione influisce sulla stabilità dell'enzima attraverso i seguenti tre effetti:
1) produrre barriere spaziali;
2) Produrre restrizioni alla diffusione;
3) attacco covalente multipunto.

12. metodi di stabilizzazione:

(i) immobilizzazione (legame chimico, metodo di incorporazione, ecc.): 1) generare barriere spaziali: inibire l'inattivazione chimica; 2) generare limitazioni alla diffusione: incorporare l'enzima all'interno delle particelle porose, dove il substrato entra in contatto con la superficie delle particelle porose prima di diffondersi all'interno per interagire con l'enzima, senza essere controllato dalla concentrazione del substrato; 3) legame covalente multipunto: legare covalentemente l'enzima alla superficie del vettore in più punti, oppure reticolare l'enzima con un reagente bifunzionale o abbassare l'enzima per incapsularlo nel vettore Il poro stretto può rendere la conformazione dell'enzima più solida, impedendo così che la conformazione dell'enzima passi dallo stato di ripiegamento a quello di allungamento in modo eccessivo.

13. Ribonucleasi: È una descrizione di RNA con attività catalitica, la cui natura chimica è che l'acido ribonucleico ha la funzione catalitica di un enzima, e il substrato può essere una molecola diversa o alcune parti della stessa molecola di RNA.

14. nucleasi naturali: (a) nucleasi di tipo shear (catalizzano il taglio di RNA auto ed eterogeneo, endonucleasi dell'acido nucleico): 1) nucleasi a martello; 2) nucleasi a forcina; 3) enzima complesso proteina-RNA; b) nucleasi di splicing: include introni del gruppo Ⅰ e introni del gruppo Ⅱ; per ottenere l'autoscissione dell'RNA; con attività di endonucleasi e ligasi dell'acido nucleico.

15. Selezione in vitro: a partire da una libreria molecolare casuale di grande capacità costruita con molecole di RNA o DNA ordinate in modo casuale, in cui viene vagliato un numero molto piccolo di molecole con funzioni specifiche.

16. Aptamero: I frammenti di RNA o DNA che possono legarsi in modo specifico ed efficiente a ligandi come sostanze organiche o proteine sono chiamati rispettivamente aptameri di RNA o aptameri di DNA.

17. Programma di screening degli aptameri: 1) sintetizzare chimicamente una libreria di molecole di DNA, in una posizione sulla catena molecolare per introdurre un ordine completamente casuale o parzialmente mutato, le estremità della molecola è un ordine fisso, al fine di amplificazione PCR; 2) dopo alcuni cicli di amplificazione PCR, trascrizione in vitro per formare una libreria di RNA ordinato casualmente; 3) queste molecole di RNA attraverso la combinazione di colonne cromatografiche di affinità per molecole bersaglio, in base alle dimensioni dell'RNA e alla capacità di legame della molecola bersaglio saranno distinte, le molecole di RNA con forte legame sono state infine eluite; 4) le molecole di RNA eluite dopo la trascrizione inversa, l'amplificazione PCR, la trascrizione, nel successivo ciclo di screening, dopo 5-10 cicli, per ottenere la libreria arricchita con molecole bersaglio ad alta affinità di molecole di RNA.

18. Processo di screening della nucleasi: 1) trascrivendo una sequenza casuale di RNA per costruire una libreria casuale di DNA; 2) la libreria casuale con molecole ad attività catalitica può catalizzare il substrato ed effettuare la legatura covalente; 3) il prodotto di reazione attraverso l'RNA immobilizzato nel substrato 5' fine dell'accoppiamento complementare sequenziale di colonne di affinità oligonucleotidica, adsorbimento selettivo della libreria casuale di coloro che possono catalizzare le molecole di RNA nella reazione di legatura; 4) dopo l'eluizione ad alto sale: trascrizione inversa, amplificazione PCR, trascrizione e ingresso nel successivo ciclo di screening; 5) nel successivo ciclo di screening, le mutazioni vengono introdotte nelle molecole attive con una certa frequenza mediante PCR a rischio di errore, il che aumenta la poliselettività molecolare della libreria casuale ottenuta dallo screening; 6) dopo diversi cicli di screening, le molecole di RNA con attività catalitica vengono arricchite e le molecole relativamente meno attive vengono eliminate.

 

 

19. Deossiribonucleasi: un frammento catalitico di DNA a singolo filamento sintetizzato con tecniche di evoluzione molecolare in vitro, dotato di un'efficiente attività catalitica e di riconoscimento della struttura.

1. Metodi di selezione in vitro: 1) sintetizzare artificialmente molecole di DNA senza trascrizione e trascrizione inversa e amplificarle direttamente mediante PCR; 2) ottenere molecole di DNA a singolo filamento: L'amplificazione PCR viene eseguita attaccando una biotina al primer e facendo passare il prodotto PCR attraverso la colonna di affinità delle proteine biotina per la separazione dei filamenti positivi e negativi; 3) introdurre ioni metallici divalenti come cofattori; 4) introdurre alcuni gruppi funzionali aggiuntivi nel DNA per aumentare la capacità di riconoscimento della struttura e delle deossiribonucleasi. gruppi funzionali aggiuntivi nel DNA per aumentare l'affinità strutturale e funzionale.

2. Classificazione delle deossiribonucleasi: (deossiribonucleasi che scindono l'RNA) (deossiribonucleasi che scindono il DNA) (deossiribonucleasi con attività chinasica) (deossiribonucleasi con funzione di ligasi) (catalizzano la reazione di chelazione metallica della porfirina cicloesile)

3. acido nucleico antisenso: molecola di DNA o RNA che si lega a una molecola di mRNA, formando una barriera spaziale che impedisce il legame con il ribosoma e quindi la traduzione in una proteina, oltre a degradare l'mRNA.

4. progettazione razionale di molecole enzimatiche: studio di enzimi naturali o effettivamente mutabili utilizzando vari metodi di biochimica, cristallografia, spettroscopia, ecc. per ottenere le caratteristiche molecolari degli enzimi. Struttura spaziale. La relazione tra struttura e funzione, così come i residui aminoacidici e altre informazioni, per poi utilizzarle come base per la modifica degli enzimi.

5. Progettazione non razionale della molecola enzimatica: senza la necessità di informazioni precise sulla struttura della molecola enzimatica, la molecola enzimatica viene trasformata mediante mutazione casuale, ricombinazione genetica, screening in bianco e altri metodi, e l'enzima mutante della natura richiesta viene selezionato in modo direzionale.

6. Evoluzione diretta di molecole enzimatiche: cioè la direzione di sviluppo delle molecole enzimatiche; si tratta di partire da uno o più enzimi genitori esistenti (naturali o ottenuti artificialmente), di costruire una libreria di enzimi mutanti artificiali attraverso la mutazione o la ricombinazione dei geni e di ottenere infine gli enzimi evolutivi con determinate caratteristiche delle aspettative principali attraverso lo screening. Evoluzione diretta = mutazione casuale + ricombinazione in avanti + selezione (o screening).

7. PCR a rischio di errore: Quando si utilizza l'enzima Taq per l'amplificazione PCR del gene bersaglio, la frequenza di mutazione dell'enzima Taq viene modificata regolando le condizioni di reazione, come l'aumento della concentrazione di Mg2+, l'aggiunta di ioni Mn, la variazione della concentrazione di dNTP nel sistema, ecc. in modo da introdurre casualmente mutazioni nel gene bersaglio con una certa frequenza per costruire una libreria di mutazioni e quindi selezionare o sottoporre a screening i mutanti richiesti.

8. PCR continua a rischio di errore: Utilizzare i geni mutati ottenuti da un'amplificazione PCR come modelli per l'amplificazione PCR successiva ed eseguire la mutagenesi casuale in modo continuo e ripetuto, in modo che le piccole mutazioni dopo ogni volta si accumulino e producano importanti mutazioni intenzionali.

9. Riorganizzazione del DNA: Combinare le mutazioni positive ottenute in diversi geni per formare un nuovo pool di geni mutati, noto anche come PCR sessuale.

10. Operazione di riorganizzazione del DNA: I frammenti di DNA isolati dal pool di geni con mutazione positiva vengono tagliati casualmente dalla deossiribonucleasi Ⅰ per ottenere frammenti casuali; dopo diversi cicli di PCR senza primer, nel processo di PCR i frammenti casuali vengono utilizzati come modelli e primer reciproci per l'amplificazione, fino a ottenere i geni a lunghezza completa, il che porta alla ricombinazione tra frammenti di geni diversi e alla ricombinazione di mutazioni intenzionali nei genitori. Intraprendere la ricombinazione.

Argomenti sull'estrazione e la modifica di componenti biologici basati sull'intelligenza artificiale (20-22 settembre \ Jinan)

11. Metodo dell'estensione scaglionata: Nella reazione di PCR, l'annealing e l'estensione convenzionali sono combinate in un'unica fase e il tempo di reazione è notevolmente ridotto in modo da poter sintetizzare solo una catena nascente molto corta. La catena nascente denaturata viene quindi utilizzata come primer per annealizzarla con diversi modelli presenti contemporaneamente nel sistema, mentre l'estensione continua. Questo processo viene ripetuto fino alla produzione di un frammento genico completo, che risulta in molecole di DNA nascente distanziate tra loro e contenenti diverse sequenze di templato. Tali molecole di DNA nascente contengono un gran numero di combinazioni di mutazioni che facilitano la generazione di nuove proprietà enzimatiche.

12. Libreria genica: il DNA genomico di un organismo viene parzialmente digerito con endonucleasi di restrizione, la sezione dell'enzima viene inserita nelle molecole di DNA portante, tutte le molecole portanti inserite nei frammenti di DNA genomico della collezione di molecole portanti conterranno l'intero genoma di questo organismo, che costituisce anche la libreria genica dell'organismo.

13. Rappresentatività della libreria: si riferisce alla capacità delle molecole di DNA contenute nella libreria di riflettere completamente tutti i possibili cambiamenti e alterazioni dei geni esogeni, che è l'indicatore più importante della qualità della libreria. È l'indicatore più importante della qualità della libreria. L'indicatore della rappresentatività della libreria è la capacità della libreria stessa.

14. Capacità della libreria: si riferisce al numero di cloni ricombinanti indipendenti contenuti nella libreria di mutazioni originale costruita.

15. Vettori per la costruzione di librerie di mutazioni: (sistema di vettori fagici λ) (sistema di vettori plasmidici) (sistema di vettori di espressione di cellule di mammifero).

16. Mimetismo enzimatico: noto anche come enzima artificiale o modello enzimatico, è una scienza applicata che imita la forma e le dimensioni del sito attivo dell'enzima, il suo microambiente e altre caratteristiche strutturali, nonché il meccanismo d'azione e la stereochimica dell'enzima a livello molecolare.

17. Il (gruppo catalitico) e il (substrato) del modello enzimatico devono avere caratteristiche stereochimiche che coincidono, il che è molto importante per la formazione di una buona specificità di reazione e potenza catalitica.

18. Chimica "soggetto-ospite": Il campo della chimica in cui il soggetto (enzima) e l'ospite (substrato) formano complessi stabili attraverso leganti e altri legami secondari è chiamato chimica "soggetto-ospite".

19. Classificazione degli enzimi simulati: (a) in base al tipo: 1) modelli di enzimi semplici; 2) modelli di enzimi meccanici; 3) composti semplici sintetici simili agli enzimi; (b) in base alle proprietà: 1) modelli di enzimi soggetto-ospite; 2) modelli di enzimi micellari; 3) peptidasi; 4) enzimi semisintetici; 5) enzimi a impronta molecolare; 6) enzimi anticorpali.

20. Anticorpo-enzima: è il prodotto dell'alta selettività dell'anticorpo e dell'elevata capacità catalitica dell'enzima; l'essenza è una classe di immunoglobuline con capacità catalitica, nota anche come anticorpo catalitico, la cui specificità supera la velocità catalitica della reazione dell'enzima, e alcune di esse possono raggiungere anche la velocità catalitica dell'enzima.

21. Imprinting molecolare: processo di preparazione di un polimero selettivo per un composto, il composto è chiamato molecola impressa, detta anche molecola modello.

22. Principio dell'imprinting molecolare (metodo di preparazione dell'imprinting molecolare): 1) selezionare il monomero funzionale della molecola impressa, in modo che i due abbiano una reazione complementare; 2) nella molecola impressa -- complessi monomerici intorno alla reazione di polimerizzazione; 3) rimuovere la molecola impressa dal polimero mediante estrazione; 4) la formazione di un polimero trattenuto all'interno della molecola impressa con la stessa forma esatta, la dimensione della cavità, il polimero può essere altamente selettivo rilegare le molecole impresse con alta selettività.

23. Tipi di imprinting molecolare di superficie: 1) imprinting molecolare sulla superficie di materiali inorganici come vettori; 2) modifica superficiale di materiali solidi; 3) imprinting superficiale di proteine.

24. Bio-imprinting: un tipo di imprinting molecolare, si riferisce ai materiali biologici naturali (come proteine e saccaridi) come scheletro, sui quali viene effettuato l'imprinting molecolare e il processo di generazione delle molecole impresse con il riconoscimento specifico della cavità.

Principio del bioimprinting: la flessibilità della conformazione delle biomolecole è annullata nella fase organica anidra e le loro conformazioni sono fisse, quindi i cambiamenti conformazionali prodotti dall'interazione tra la molecola modello e la biomolecola nella soluzione acquosa possono essere conservati solo quando vengono spostati nella fase organica anidra.

26. Conversione di proteine in enzimi semisintetici mediante bio-imprinting: 1) Denaturazione parziale della proteina per disturbare la conformazione della proteina di partenza; 2) Aggiunta della molecola impressa in modo che la molecola impressa sia completamente legata alla proteina parzialmente deformata; 3) Dopo l'interazione della molecola impressa con la proteina, reticolazione della proteina impressa con un agente reticolante; 4) Rimozione della molecola impressa mediante dialisi.

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Composto Glucoamilasi	9032-08-0
Pullulanase	9075-68-7
Xilanasi	37278-89-0
Cellulasi	9012-54-8
Naringinasi	9068-31-9
β-amilasi	9000-91-3
Glucosio ossidasi	9001-37-0
alfa-amilasi	9000-90-2
Pectinasi	9032-75-1
Perossidasi	9003-99-0
Lipasi	9001-62-1
Catalasi	9001-05-2
TANNASIO	9025-71-2
Elastasi	39445-21-1
Ureasi	9002-13-5
DEXTRANASE	9025-70-1
L-lattico deidrogenasi	9001-60-9
Deidrogenasi malato	9001-64-3
Colesterolo ossidasi	9028-76-6