IVD hammaddelerindeki çeşitli enzimlerin özellikleri ve uygulamaları nelerdir?

Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR), organizma dışında DNA replikasyonu olarak kabul edilen belirli DNA parçalarını çoğaltmak için kullanılan bir moleküler biyoloji tekniğidir; bu sayede çok az miktarda DNA parçası kolayca tanımlanabilecek ve tanınabilecek kadar çoğaltılır.

PCR reaksiyonları için "enzimler" çok önemli bir rol oynar ve her bir "enzim" türü farklı bir aktiviteye ve işleve sahiptir. Peki ne tür enzimler vardır? Ve IVD alanındaki uygulamaları nelerdir?

DNA polimeraz

Tanım: DNA'yı şablon olarak kullanan, DNA'nın 5-terminalinden 3-terminal ucuna replike olan ve yavru DNA oluşturmak için substrat dNTP moleküllerinin polimerizasyonunu katalize eden bir enzim türüdür.

Ana faaliyetler ve roller: DNA sentezini katalize eder. 1, polimerizasyon. 2, 3, → 5, ekzonükleaz aktivitesi - düzeltme rolü 3, 5, → 3, ekzonükleaz aktivitesi - eksizyon onarımı rolü 4, pirofosfat hidrolizi rolü 5, pirofosfat değişimi.

IVD alanındaki yaygın DNA polimerazlar şunları içerir: Reaksiyon sistemi 70°C'ye ısıtılmadan önce Taq enziminin aktivitesini kapatmak için kimyasal modifikasyon kullanan ve böylece spesifik olmayan amplifikasyonu engelleyen Taq hot-start enzimi. Bir polimerizasyon merkezi ve bölünme merkezi içeren yüksek sadakatli DNA polimeraz, polimerizasyon merkezi polimerizasyondan sorumlu 5′-3′ polimeraz aktivitesine sahiptir; bölünme merkezi, eşleşmemiş nükleotidlerin çıkarılmasından sorumlu 3′-5′ ekzonükleaz aktivitesine (düzeltme okuma aktivitesi olarak da bilinir) sahiptir. (proofreading aktivitesi olarak da bilinir), eşleşmemiş nükleotidlerin eksizyonundan sorumludur.

ters transkriptaz

Tanım: RNA'yı şablon olarak kullanan ve 5′-3′ yönünde RNA şablonuna tamamlayıcı tek bir DNA ipliği sentezleyen bir enzim.

Başlıca aktiviteler ve roller: 1. RNA'ya yönelik DNA polimeraz aktivitesi. 2. RNaz H aktivitesi 3. DNA'ya yönelik DNA polimeraz aktivitesi.

IVD alanında uygulama: 1, ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) 2, cDNA kütüphane yapımı 3, RNA dizileme 4, RT-qPCR, 2019 New Crown Nucleic Acid Detection yapılandırılmış sistem reaktifleri, kaçınılmaz olarak ters transkriptaza katılacaktır. Bunun nedeni, PCR reaksiyonlarını gerçekleştirmek için RNA virüslerinin DNA'ya ters transkript edilmesi gerektiğidir.

RNA polimeraz

Tanım: Şablon polimeraz olarak bir DNA veya RNA zinciri, çünkü hücrede DNA transkripsiyonunun genetik bilgisi ile, transkriptaz olarak da bilinir.

Ana faaliyetler ve roller: 1, şablon olarak DNA ile; 2, polimerizasyon reaksiyonları yoluyla nükleik asitlerin sentezini katalize eder; 3, nükleotidlerin 3,→5,-fosfodiester bağları oluşturmasına neden olur; 4, baz tamamlayıcı eşleşme ilkesine göre şablon dizisini 5′-3′ yönünde kopyalar.

IVD alanındaki yaygın RNA polimerazlar arasında, özellikle 5'→3′ yönünde RNA oluşumu sürecini katalize eden T7 RNA polimeraz bulunmaktadır. Şu anda in vitro diagnostikte SAT teknolojisi, RNA amplifikasyonu için T7 RNA polimeraz uygulamasıdır. Bu teknoloji patojen tespiti, kan virüsü taraması ve çevresel mikrobiyal tespitte yaygın olarak kullanılmaktadır.

Proteinaz K

Tanım: Proteinaz K, Candida albicans'tan izole edilen güçlü bir proteolitik enzimdir ve DNA ekstraksiyonu için önemli bir reaktiftir.

Ana işlev: membran proteinlerini ve DNA'ya bağlı proteinleri bozmak ve DNA'nın serbest kalmasını sağlamak. IVD alanında uygulama: plazmid, genomik DNA, RNA izolasyonu ve ekstraksiyonu için. Viral nükleik asit tespitinde, proteinaz K viral kapsid proteinlerini parçalayıp inaktive ederken, nükleik asit ekstraksiyonunu tamamlamak için viral genomu serbest bırakabilir.

UDG Enzimi

Tanım: urasil -N- glikozilaz veya UNGaz olarak da bilinen diğer adı urasil-DNA glikozilaz. DNA ve RNA monomerlerini oluşturan ve genetik bilgiyi kodlayan kimyasal yapıdır.

Fonksiyon: Kalan PCR kontaminasyonunun etkin kontrolü. IVD'de uygulama: Klinik testler için PCR reaktifleri, kontaminasyonu önlemek için UDG enzimi içerir.

Endonükleaz

Tanım: belirli bir nükleotid dizisini tanıyan ve her zincirdeki belirli bir bölgede iki deoksiribonükleotid arasındaki fosfodiester bağını kesen, restriksiyon enzimleri olarak adlandırılan bir enzim sınıfı.

Rol: 3 tip vardır: tip 1: hem modifikasyon hem de tanıma bölünmesi, bölünme bölgesi tanıma dizisinden uzaktır. tip 2: sadece tanıma bölünmesi, bölünme bölgesi tanıma dizisidir. tip 3: hem modifikasyon hem de tanıma bölünmesi, bölünme bölgesi ve tanıma dizisi daha yakındır.

IVD alanındaki uygulamalar: 1, gen lokalizasyonu ve gen izolasyonu, 2, DNA moleküler baz dizisi analizi, 3, genetik mühendisliği düzenleme, 4, DNA fiziksel haritasının oluşturulması.

Dekonjugasyon enzimi

Tanım: ATP hidrolizinin sağladığı enerjiyi kullanarak çift sarmallı DNA nükleotidlerinin eşleşmesiyle oluşan hidrojen bağlarını çözerek tek sarmallı DNA oluşturmak.

Rolü: DNA veya RNA replikasyonu sırasında DNA veya RNA'nın dekonvolüsyonunun katalizlenmesinde rol oynar.

IVD alanında uygulama: Çift sarmalı çözmek ve amplifikasyonu uzatmak için qPCR'deki termal denatürasyon işlemi yerine ısı ile stabilize edilmiş dekonjugasyon enzimi kullanan izotermal amplifikasyon teknolojisi. Bu teknik, spesifik olmayan amplifikasyona daha az eğilimlidir ve ayrıca PCR döngüsünde sıcaklığı yükseltme ve düşürme işlemini önler, tespit için sadece basit ekipman gerektirir.

Modifiye Edici Enzim

Tanım: Nadir bazların RNA veya DNA'ya dahil edilmesini katalize eden veya restriksiyon endonükleazlar tarafından yok edilmesini önlemek için orijinal bazları modifiye eden bir enzim.

Rolü: Diğer enzimlerin yapısının kovalent modifikasyonu, böylece yüksek derecede aktif bir form ile nispeten daha az aktif bir form arasında birbirlerine dönüşmeleri.

IVD'de uygulama: 5mC/m6A nükleik asit modifiye edici enzim aktivite deneyi HTMR yöntemi, DNA/RNA metilasyonunu hedefleyen küçük molekül modülatörlerinin keşfi ve aktivite değerlendirmesi için güçlü kanıtlar sağlar.

Pirofosfataz

TANIM: Bir molekül pirofosfatın iki molekül fosfat iyonuna dönüşümünü katalize eden bir enzim.

Fonksiyon: Isıya dayanıklı inorganik pirofosfataz 100 ° C'de 4 saat ısıtıldığında hala 100% aktiftir, bu nedenle üretilen inorganik pirofosfat tarafından PCR inhibisyonunu kaldırmak ve DNA replikasyonunu arttırmak için PCR reaksiyonlarında kullanılabilir.

taq antikoru

Tanım: Taq DNA polimeraza karşı antikor.

Fonksiyon: PCR amplifikasyonu sırasında Taq Antikoru, yüksek sıcaklıkta denatürasyondan önce DNA polimeraz aktivitesini inhibe etmek için Taq enzimine bağlanır ve düşük sıcaklıkta primer dimerinin neden olduğu primerlerin spesifik olmayan tavlanmasını ve spesifik olmayan amplifikasyonu etkili bir şekilde inhibe edebilir.

IVD'de Uygulama: Taq antikorunun yüksek muhafaza etkinliği, yeni koronavirüs nükleik asit tespit kitinin tespit hassasiyetini artırabilir ve yeni koronavirüs tespitine yardımcı olabilir.

Standart PCR işlemi üç adıma ayrılır: DNA denatürasyonu, tavlama ve uzatma. İnaktivasyon reaksiyonu, PCR'ın başlangıcında 10 dakika boyunca 50°C'ye veya 2 dakika boyunca 95°C'ye kadar ısıtılarak gerçekleşebilir ve UDG enzimi, reaksiyon sistemindeki kontamine edici DNA tarafından üretilen amplifikasyonu ortadan kaldırır. Daha sonra, şablon DNA yüksek sıcaklıkta denatüre edilerek tek iplikli DNA'ya dönüştürülür. iki primer, DNA polimeraz ve uygun sıcaklık altında sırasıyla iki şablon DNA ipliği ile tavlanır. Taq Antikoru, DNA polimeraz aktivitesini inhibe etmek ve düşük sıcaklıklarda spesifik olmayan amplifikasyonu inhibe etmek için Taq enzimine bağlanır. PCR reaksiyonuna inorganik pirofosfataz eklenmesi pirofosfatı ortofosfata hidrolize ederek reaksiyonun amplifikasyon verimliliğini artırır.

Hammadde enzimi, moleküler test endüstrisinin yukarı akış endüstri zinciridir. 2020 yılında, nükleik asit testine olan büyük talebin önünde, moleküler tanı reaktiflerine yönelik pazar talebi önemli ölçüde artmış ve sonuç olarak hammadde enzim endüstrisi hızla gelişmiştir. Üretim açısından, moleküler test hammaddesi enzim üretiminin yüksek teknik eşiği nedeniyle, mevcut iç pazar esas olarak ithalata bağımlıdır. Son yıllarda, yerli üretim sürecinin yükselişiyle birlikte, bir dizi hammadde işletmesi listelenmiş, ürün kategorileri de kademeli olarak zenginleştirilmiştir, ancak yerli IVD hammadde endüstrisinin hala gelişimin erken aşamalarında olduğu inkar edilemez, pazar payı da nispeten küçüktür, geleceğin iyileştirilmesi için daha geniş bir alanda var olması kaçınılmazdır.

Şimdi Bize Ulaşın!

Fiyata ihtiyacınız varsa, lütfen aşağıdaki forma iletişim bilgilerinizi doldurun, genellikle 24 saat içinde sizinle iletişime geçeceğiz. Bana e-posta da gönderebilirsiniz info@longchangchemical.com Çalışma saatleri içinde (8:30 - 6:00 UTC+8 Pzt.~Sat.) veya hızlı yanıt almak için web sitesi canlı sohbetini kullanın.

Bileşik Glukoamilaz	9032-08-0
Pullulanase	9075-68-7
Ksilanaz	37278-89-0
Selülaz	9012-54-8
Naringinaz	9068-31-9
β-Amilaz	9000-91-3
Glikoz oksidaz	9001-37-0
Alfa-Amilaz	9000-90-2
Pektinaz	9032-75-1
Peroksidaz	9003-99-0
Lipaz	9001-62-1
Katalaz	9001-05-2
TANNASE	9025-71-2
Elastaz	39445-21-1
Urease	9002-13-5
DEXTRANASE	9025-70-1
L-Laktik dehidrojenaz	9001-60-9
Dehidrojenaz malat	9001-64-3
Kolesterol oksidaz	9028-76-6