<\/p>\n
H\u0131zl\u0131 cevap:<\/strong> Enzyme and food-processing ingredients are usually selected by substrate fit, pH and temperature window, dosage, and whether the end-use specification is acceptable for the target process. The strongest commercial choice is the one that performs consistently under real processing conditions.<\/p>\n <\/p>\n 1. Enzim \u00fcretimi<\/strong><\/p>\n Enzimler mikroorganizmalardan, hayvanlardan ve bitkilerden \u00fcretilir, ancak ana kaynak mikroorganizmalard\u0131r. Mikroorganizmalar bitki ve hayvanlara g\u00f6re daha fazla avantaja sahip oldu\u011fundan, fermantasyon yoluyla enzim \u00fcretmek i\u00e7in genellikle m\u00fckemmel enzim \u00fcreten su\u015flar se\u00e7ilir. Fermantasyon suyundaki enzim konsantrasyonunu art\u0131rmak i\u00e7in m\u00fckemmel su\u015flar se\u00e7ilir, geneti\u011fi de\u011fi\u015ftirilmi\u015f bakteriler geli\u015ftirilir ve fermantasyon ko\u015fullar\u0131 optimize edilir. End\u00fcstriyel \u00fcretim, y\u00fcksek s\u0131cakl\u0131\u011fa dayan\u0131kl\u0131 \u03b1-amilaz, alkaliye dayan\u0131kl\u0131 proteaz ve lipaz gibi yeni enzimlerin \u00f6zel performans\u0131na ihtiya\u00e7 duyar. Bu nedenle, yeni enzimlerin \u00f6zel performans\u0131n\u0131 \u00fcretmek i\u00e7in su\u015flar\u0131 ara\u015ft\u0131rmam\u0131z ve geli\u015ftirmemiz gerekir.<\/p>\n 2. Enzim haz\u0131rlama<\/strong><\/p>\n Enzim ay\u0131rma ve safla\u015ft\u0131rma teknolojisi, mevcut biyoteknoloji \"i\u015flem sonras\u0131 s\u00fcrecinin\" \u00e7ekirde\u011fini olu\u015fturmaktad\u0131r. Mikrobiyal h\u00fccrelerden ve bunlar\u0131n fermantasyon suyundan veya hayvan ve bitki h\u00fccrelerinden ve bunlar\u0131n k\u00fclt\u00fcr suyundan enzimlerin ayr\u0131lmas\u0131 ve safla\u015ft\u0131r\u0131lmas\u0131nda \u00e7e\u015fitli ay\u0131rma ve safla\u015ft\u0131rma tekniklerinin kullan\u0131lmas\u0131, enzim preparatlar\u0131n\u0131n ulusal ekonominin her alan\u0131nda daha yayg\u0131n olarak kullan\u0131lmas\u0131n\u0131 sa\u011flamak i\u00e7in farkl\u0131 safl\u0131ktaki y\u00fcksek derecede aktif enzim preparatlar\u0131ndan yap\u0131lm\u0131\u015ft\u0131r, enzim preparatlar\u0131n\u0131n aktivitesini, safl\u0131\u011f\u0131n\u0131 ve verimini iyile\u015ftirmelidir, yeni ay\u0131rma ve safla\u015ft\u0131rma tekniklerini inceleme ihtiyac\u0131.<\/p>\n 3. Enzim ve h\u00fccre immobilizasyonu<\/strong><\/p>\n Enzim ve h\u00fccre immobilizasyonu ara\u015ft\u0131rmalar\u0131, enzim m\u00fchendisli\u011finin merkezi g\u00f6revidir. Enzimlerin stabilitesini art\u0131rmak, enzim preparatlar\u0131n\u0131 yeniden kullanmak, enzim preparatlar\u0131n\u0131n uygulama aral\u0131\u011f\u0131n\u0131 geni\u015fletmek, enzimlerin immobilizasyonu i\u00e7in \u00e7e\u015fitli immobilizasyon y\u00f6ntemleri kullanmak, immobilize glikoz izomeraz, immobilize karbamoilaz vb. gibi immobilize enzimlerin haz\u0131rlanmas\u0131, immobilize enzimlerin belirlenmesi ve immobilize enzimlerin \u00e7e\u015fitli y\u00f6nlerinin uygulanmas\u0131 i\u00e7in ara\u015ft\u0131rma geli\u015ftirme. \u0130mmobilize enzim hala g\u00fc\u00e7l\u00fc bir canl\u0131l\u0131\u011fa sahiptir. Biyokimya, kimya m\u00fchendisli\u011fi, mikrobiyoloji, polimerler ve t\u0131p gibi \u00e7e\u015fitli alanlar taraf\u0131ndan olduk\u00e7a de\u011ferlidir.<\/p>\n \u0130mmobilize h\u00fccreler, immobilize enzimler temelinde geli\u015ftirilmektedir. \u00c7e\u015fitli immobilize biyolojik h\u00fccreler yapmak i\u00e7in mikrobiyal h\u00fccreleri, hayvan h\u00fccrelerini ve bitki h\u00fccrelerini immobilize etmek i\u00e7in \u00e7e\u015fitli immobilizasyon y\u00f6ntemleri kullan\u0131lmaktad\u0131r. \u0130mmobilize h\u00fccrelerin enzimatik \u00f6zelliklerinin, \u00f6zellikle kinetik \u00f6zelliklerinin incelenmesi ve \u00e7e\u015fitli uygulamalarda immobilize h\u00fccrelerin ara\u015ft\u0131r\u0131lmas\u0131 ve geli\u015ftirilmesi, g\u00fcn\u00fcm\u00fczde enzim m\u00fchendisli\u011finde s\u0131cak bir konudur.<\/p>\n \u0130mmobilizasyon teknolojisi, enzim teknolojisinin modernizasyonunda \u00f6nemli bir kilometre ta\u015f\u0131d\u0131r ve end\u00fcstriyel uygulamalarda do\u011fal enzimlerin eksikliklerinin \u00fcstesinden gelmek ve enzim reaksiyonunun \u00f6zelliklerini tam olarak oynamak i\u00e7in \u00e7\u0131\u011f\u0131r a\u00e7an bir teknolojidir. \u0130mmobilizasyon teknolojisinin geli\u015fimi olmadan modern enzim teknolojisinin olamayaca\u011f\u0131 s\u00f6ylenebilir.<\/p>\n 4. Enzim molek\u00fcler modifikasyonu<\/strong><\/p>\n Enzim molek\u00fcler modifikasyonu olarak da bilinir. Enzimin stabilitesini iyile\u015ftirmek, antijenisiteyi azaltmak, v\u00fccuttaki t\u0131bbi bakterilerin yar\u0131 \u00f6mr\u00fcn\u00fc uzatmak i\u00e7in, enzim molek\u00fcl\u00fcn\u00fcn yap\u0131s\u0131n\u0131 de\u011fi\u015ftirmek i\u00e7in \u00e7e\u015fitli modifikasyon y\u00f6ntemleri kullanarak, do\u011fal bir enzim olu\u015fturmak i\u00e7in baz\u0131 m\u00fckemmel \u00f6zelliklere sahip de\u011fildir (daha y\u00fcksek stabilite, antijenisite yok, proteaz hidrolizine diren\u00e7 vb.) ve hatta enzim uygulamas\u0131n\u0131n de\u011ferini art\u0131rmak ve daha b\u00fcy\u00fck ekonomik ve sosyal faydalar elde etmek i\u00e7in enzim uygulamas\u0131n\u0131 geni\u015fletmek i\u00e7in yeni bir enzim aktivitesi yarat\u0131r. ve sosyal faydalar.<\/p>\n Enzim molek\u00fcler modifikasyonu iki a\u00e7\u0131dan ger\u00e7ekle\u015ftirilebilir:<\/strong><\/p>\n (1) Enzim molek\u00fcl yap\u0131s\u0131 genini de\u011fi\u015ftirmek i\u00e7in protein m\u00fchendisli\u011fi teknolojisini kullanarak, makul bir birincil yap\u0131ya ve uzay yap\u0131s\u0131na sahip m\u00fckemmel \u00f6zelliklere ve y\u00fcksek aktiviteye sahip yeni enzimi (mutant enzim) elde etmeyi beklemek.<\/p>\n (2) Enzim proteinlerinin birincil yap\u0131s\u0131n\u0131n kimyasal veya enzimatik modifikasyonu veya yan zincir grubunun kimyasal modifikasyonu ile enzim molek\u00fcl\u00fcn\u00fcn kimyasal modifikasyonu. Enzimatik \u00f6zellikleri de\u011fi\u015ftirmek i\u00e7in. Bu enzimler \u00f6zellikle enzimolojideki temel ara\u015ft\u0131rmalarda ve t\u0131pta faydal\u0131d\u0131r.<\/p>\n Enzim \u00fcretiminde kullan\u0131lan mikroorganizmalar filamentli mantarlar, mayalar ve bakteriler olmak \u00fczere \u00fc\u00e7 ana grupta toplanmaktad\u0131r. Baz\u0131 \u00f6nemli end\u00fcstriyel enzimlerin su\u015flar\u0131 ve kullan\u0131m alanlar\u0131 a\u015fa\u011f\u0131da listelenmi\u015ftir:<\/p>\n Amilaz<\/strong><\/p>\n Amilazlar ni\u015fastay\u0131 hidrolize ederek macun k\u0131vam\u0131nda malt oligosakkaritleri ve maltoz \u00fcretir. \u00dcretimde Bacillus cinsinden Bacillus subtilis ve Bacillus licheniformis ile derin fermantasyon hakimdir ve bu sonuncusu \u0131s\u0131ya dayan\u0131kl\u0131 enzimler \u00fcretir. Aspergillus ve Rhizopus su\u015flar\u0131 ile derin ve yar\u0131 kat\u0131 fermantasyonlar da g\u0131da i\u015fleme i\u00e7in kullan\u0131lmaktad\u0131r [6]. Amilazlar temel olarak \u015feker \u00fcretiminde, tekstil ha\u015f\u0131l s\u00f6kmede, fermantasyon hammaddelerinin i\u015flenmesinde ve g\u0131da i\u015flemede kullan\u0131l\u0131r. Glukoamilaz, ni\u015fastay\u0131 glukoza hidrolize edebilir ve g\u00fcn\u00fcm\u00fczde neredeyse tamamen Aspergillus niger'in derin fermantasyonu ile \u00fcretilmektedir ve \u015feker \u00fcretiminde, alkol \u00fcretiminde ve fermantasyon hammaddelerinin i\u015flenmesinde kullan\u0131lmaktad\u0131r.<\/p>\n Proteaz<\/strong><\/p>\n Su\u015flar\u0131n kullan\u0131m\u0131 ve en \u00e7ok \u00e7e\u015fidin \u00fcretimi. Liken \u015fekilli basil, k\u0131sa k\u00fc\u00e7\u00fck basil ve basil subtilis ile bakteriyel proteaz\u0131n derin fermantasyon \u00fcretimi; streptomyces, Aspergillus ile n\u00f6tr proteaz\u0131n derin fermantasyon \u00fcretimi ve deri t\u00fcy giderme, k\u00fcrk yumu\u015fatma, ila\u00e7, g\u0131da end\u00fcstrisi i\u00e7in kullan\u0131lan Aspergillus asidik proteaz; Trichoderma spp. ile baz\u0131 bakteriler, orijinal buza\u011f\u0131n\u0131n midesinden \u00e7\u0131kar\u0131lan peynir mayas\u0131 yerine peynir \u00fcretiminde peynir mayas\u0131n\u0131n yar\u0131 kat\u0131 fermantasyon \u00fcretiminde.<\/p>\n Glikoz izomeraz<\/strong><\/p>\n 70'li y\u0131llarda h\u0131zla geli\u015fen bir t\u00fcr. Streptomyces h\u00fccreleri ilk olarak derin fermantasyonla elde edilir ve immobilizasyondan sonra glikoz \u00e7\u00f6zeltisi, g\u0131da end\u00fcstrisinde sakaroz yerine kullan\u0131labilen yakla\u015f\u0131k 50% fruktoz i\u00e7eren bir \u015furuba d\u00f6n\u00fc\u015ft\u00fcr\u00fcl\u00fcr. Amilaz, glukoamilaz ve glukoz izomeraz vb. ile m\u0131s\u0131r ni\u015fastas\u0131n\u0131n \u015furup haline getirilmesi geli\u015fmekte olan \u015feker end\u00fcstrilerinden biri haline gelmi\u015ftir.<\/p>\n \u0130fade Sistemlerinin Se\u00e7imi 2 Maya Ekspresyon Sistemi (Picrosporum) 3 \u0130lk se\u00e7enek literat\u00fcrde bildirilen ifade sistemi, ikinci se\u00e7enek E. coli sistemi ve E. coli'deki ifadenin inaktif olmas\u0131 durumunda maya sistemi kullan\u0131l\u0131r. \u0130fade sistemini belirlemek i\u00e7in genin kayna\u011f\u0131na g\u00f6re, gen art\u0131 safla\u015ft\u0131rmay\u0131 kolayla\u015ft\u0131rmak i\u00e7in afinite etiketleri.<\/p>\n Enzim modifikasyonu Ab initio tasar\u0131m s\u00fcreci: 1. Kuvvet alan\u0131 geli\u015ftirme ve \u00f6rnekleme algoritmas\u0131 2. Y\u00fcksek verim testi 3. Yap\u0131 tan\u0131mlama<\/p>\n Proteinlerin y\u00f6nlendirilmi\u015f evrimi Mutant gen k\u00fct\u00fcphaneleri olu\u015fturma y\u00f6ntemleri Do\u011fal Evrim: Kendili\u011finden Mutasyon, Rekombinasyon, Do\u011fal Se\u00e7ilim DNA Kar\u0131\u015ft\u0131rma Protein Ara\u015ft\u0131rma Teknikleri 2 Protein ifade sistemi \u2461 Maya ekspresyon sistemi: k\u0131sa d\u00f6ng\u00fc, y\u00fcksek verimlilik, d\u00fc\u015f\u00fck maliyet, post-translasyonel modifikasyon mevcuttur. Uygunsuz glikozilasyon, y\u00fcksek mannoz modifikasyonu olacakt\u0131r. Temel olarak h\u00fccre i\u00e7i\/sekretuar proteinler, dis\u00fclfit ba\u011flay\u0131c\u0131 proteinler, glikozile proteinler \u00fcretmek i\u00e7in kullan\u0131l\u0131r.<\/p>\n (iii) Bakteriyofaj ekspresyon sistemi: y\u00fcksek gen kapasitesi, protein \u00e7\u00f6z\u00fcn\u00fcrl\u00fc\u011f\u00fc, toksik proteinlerin \u00fcretimi i\u00e7in uygun, memelilere benzer post-translasyonel modifikasyonlar. Yeti\u015ftirme ko\u015fullar\u0131 serttir ve baz\u0131 glikozilasyon modifikasyonlar\u0131ndan yoksundur. Temel olarak membran proteinleri, b\u00fcy\u00fck boyutlu proteinler, viral a\u015f\u0131lar, sinyal proteinleri, sitokinler, kinazlar\u0131n \u00fcretimi i\u00e7in kullan\u0131l\u0131r. \u2463 Memeli ekspresyon sistemleri: uzun d\u00f6ng\u00fc s\u00fcresi, d\u00fc\u015f\u00fck verimlilik, post-translasyonel modifikasyonlar\u0131n varl\u0131\u011f\u0131, y\u00fcksek protein biyoaktivitesi. Temel olarak karma\u015f\u0131k \u00f6karyotik proteinler, hassas PTM gerektiren proteinler \u00fcretmek i\u00e7in kullan\u0131l\u0131r. 3 Protein Safla\u015ft\u0131rma Biyolojik \u00f6zelliklere dayal\u0131: afinite kromatografisi<\/p>\n \u2460Diyaliz Ultrafiltrasyon \u2462 Jel filtrasyon kromatografisi \u2463 \u0130yon de\u011fi\u015fim kromatografisi \u2464 Afinite kromatografisi Poli-(His)'e ba\u011fl\u0131 metal iyonlar\u0131 (Ni 2+; Co 2+; Cu 2+) kullan\u0131larak immobilize metal \u015felat kromatografisi (IMAC) 6<\/sub> etiketlenmi\u015f proteinler.<\/p>\n Strep etiketli proteinlerin safla\u015ft\u0131r\u0131lmas\u0131 proteinA\/protein G afinite kromatografisi Safla\u015ft\u0131r\u0131lm\u0131\u015f protein nas\u0131l tan\u0131mlan\u0131r? 4 Elektron mikroskobu <\/p>\n In enzyme and food-processing projects, the most useful decision frame is usually application fit plus process stability: which ingredient performs under the intended pH, temperature, time, and substrate conditions without creating a downstream quality or compliance problem.<\/p>\n Why is a high-activity enzyme not automatically the best commercial choice?<\/strong> Should food and biotech ingredients be selected from data sheets alone?<\/strong> <\/p>\n 1.Enzyme production Enzymes are produced from microorganisms, animals and plants, but the main source is microorganisms. Since microorganisms have more advantages than plants and animals, generally excellent enzyme-producing strains are<\/p>","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[108],"tags":[],"class_list":["post-7253","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-enzyme-news"],"yoast_head":"\n
\n1 E. coli ifade sistemi
\n\u2460pET ifade sistemi tercih edilir
\n\u2461 Protein rekombinant ekspresyonu ve safla\u015ft\u0131rmas\u0131, \u00e7\u00f6z\u00fcn\u00fcrle\u015ftirilmi\u015f etiketler kullan\u0131larak ger\u00e7ekle\u015ftirilebilir, MBP ilk tercih olarak tercih edilir.
\n\u2462 BL21(DE3) ile tercih edilen pET24 veya pET28 (safla\u015ft\u0131rma gerekiyorsa), TB ortam\u0131 1-1,5 OD'ye kadar 37\u00b0 b\u00fcy\u00fcme, 3 OD'ye kadar 1 saat boyunca 18 \u2103 b\u00fcy\u00fcme, 10 OD'ye kadar 19 saat boyunca 0,5 mM IPTG ind\u00fcksiyonu.
\n\u2463 Y\u00fcksek ekspresyon ve d\u00fc\u015f\u00fck \u00e7\u00f6z\u00fcn\u00fcrl\u00fck i\u00e7in kurtarma \u00f6nlemleri: 15 \u2103'ye kadar so\u011futma; ortam\u0131 2xYT veya ZYP5052 (kendi kendine ind\u00fcklenen) olarak de\u011fi\u015ftirme, ekspresyon kona\u011f\u0131n\u0131 de\u011fi\u015ftirme; N-terminal ve\/veya C-terminal 2-10 amino asit kal\u0131nt\u0131lar\u0131n\u0131n kesilmesi; MBP gibi y\u00fcksek \u00e7\u00f6z\u00fcn\u00fcrl\u00fckl\u00fc proteinlerle f\u00fczyon yoluyla ekspresyon; molek\u00fcler \u015faperonlar\u0131 kimyasal olarak ind\u00fckleme, molek\u00fcler \u015faperonlar\u0131\/etkile\u015fen proteinleri birlikte eksprese etme veya ligandlar sa\u011flama.
\n\u2464 E. coli ekspresyon sisteminin avantajlar\u0131 ve dezavantajlar\u0131
\nAvantajlar\u0131: en uygun, en etkili
\nDezavantajlar\u0131: zay\u0131f salg\u0131lama ifade yetene\u011fi; dis\u00fclfit ba\u011f\u0131 olu\u015fumunda zorluk; post-translasyonel modifikasyon yok<\/p>\n
\nAvantajlar\u0131: eksojen genlerin kararl\u0131 entegrasyonu; alkol oksidaz geninin promot\u00f6r\u00fc g\u00fc\u00e7l\u00fcd\u00fcr ve ekspresyon metanol taraf\u0131ndan s\u0131k\u0131 bir \u015fekilde d\u00fczenlenebilir; rekombinant proteinler h\u00fccre i\u00e7i veya h\u00fccre d\u0131\u015f\u0131 formlarda ifade edilebilir; \u00f6karyotik ekspresyon sistemlerinde ortak olan post-translasyonel modifikasyon fonksiyonlar\u0131n\u0131 i\u00e7erir; kullan\u0131m\u0131 kolay ticari ana bilgisayarlar \/ vekt\u00f6rler vard\u0131r; amplifikasyonu kolayd\u0131r ve fermantasyon yo\u011funlu\u011fu son derece y\u00fcksektir.
\nDezavantajlar\u0131: benzersiz post-translasyonel i\u015fleme bi\u00e7imi; a\u015f\u0131r\u0131 glikozilasyon sorunu.<\/p>\n
\n\u2460Rasyonel tasar\u0131m: kodlay\u0131c\u0131 gen de\u011fi\u015fikli\u011fi ve rekombinasyon ifade testindeki protein yap\u0131s\u0131 ve i\u015flevi bilgilerine dayan\u0131r.
\nProsed\u00fcr: \u00f6ncelikle BRENDA veri taban\u0131ndan enzim yap\u0131s\u0131n\u0131 elde edin, ard\u0131ndan enzim yap\u0131s\u0131n\u0131 de\u011fi\u015ftirin ve Alphafold2 ile enzim yap\u0131s\u0131n\u0131 tahmin edin, ard\u0131ndan PyMOL yaz\u0131l\u0131m\u0131 ile enzim ve ligand molek\u00fcl\u00fc aras\u0131nda docking analizi yap\u0131n ve son olarak, yeni enzim yap\u0131s\u0131na g\u00f6re, gen dizilerini y\u00f6nl\u00fc olarak mutasyona u\u011frat\u0131n ve ard\u0131ndan yeni bir enzim elde etmek i\u00e7in rekombinant olarak ifade edin (enzimin termal stabilitesini, katalitik verimlili\u011fini ve substrat spesifikli\u011fini iyile\u015ftirmek i\u00e7in).
\n\u2461 Ak\u0131lc\u0131 olmayan tasar\u0131m: kodlama dizilerinin y\u00fcksek frekansl\u0131 mutasyonu veya rekombinasyonu ve rekombinant ifade ve y\u00fcksek verimli test<\/p>\n
\n\u2460Orijinal genleri se\u00e7in
\n\u2461\u00c7e\u015fitlilik gen mutasyon k\u00fct\u00fcphanesi olu\u015fturmak
\n\u2462 Birden fazla mutasyona u\u011fram\u0131\u015f geni vekt\u00f6rlere ba\u011flay\u0131n ve bunlar\u0131 s\u0131ras\u0131yla ilgili su\u015flarda ifade edin
\nTarama yoluyla y\u00fcksek kaliteli bir mutant gen se\u00e7in ve ard\u0131ndan mutant geni b\u00fcy\u00fck miktarlarda ifade edin.<\/p>\n
\n\u2460In vivo y\u00fcksek frekansl\u0131 rastgele mutasyon: gen replikasyon kona\u011f\u0131 olarak E. coli XL1-Red kullan\u0131m\u0131 (kusurlu DNA hasar onar\u0131m sistemi)
\nPlato a\u015famas\u0131na kadar yeti\u015ftirildi\u011finde, ortalama 2Kb'de 1 baz mutasyonu meydana gelir.
\n\u2461Rastgele Mutajenez kiti: mutasyon oran\u0131 0,1 -1,6% \/PCR, 1-16 baz mutasyonuna\/gen'e e\u015fde\u011fer
\n\u2462 Noktadan noktaya doygunluk mutagenezi<\/p>\n
\nTar\u0131msal evrim: spontane mutasyon, \u0131slah, tarama
\nLaboratuvar evrimi: h\u0131zland\u0131r\u0131lm\u0131\u015f mutasyon oran\u0131, molek\u00fcler \u0131slah, tarama<\/p>\n
\nProtein m\u00fchendisli\u011fi deneysel stratejisi
\n\u2460 Bir inaktivasyon sistemi ve\/veya bir tarama y\u00f6ntemi olu\u015fturmak i\u00e7in ba\u015flang\u0131\u00e7 genini se\u00e7in.
\n\u2461 Yap\u0131-fonksiyon ili\u015fkisi biliniyorsa, \u00f6nce rasyonel tasar\u0131m y\u00f6ntemini benimseyin.
\n\u2462Rastgele mutasyon ince ayar\u0131 ve y\u00fcksek verimli tarama
\n\u2463Sadece uygun bir ba\u015flang\u0131\u00e7 geni yoksa s\u0131f\u0131rdan tasarlay\u0131n.<\/p>\n
\n1 Protein ayr\u0131\u015ft\u0131rma ve safla\u015ft\u0131rma ile ilgili fiziksel ve kimyasal \u00f6zellikler
\nMolek\u00fcler boyut (diyaliz, ultrafiltrasyon, jel filtrasyon, santrif\u00fcjleme)
\n\u2461Molek\u00fcler \u015fekil (gradyan santrif\u00fcjleme, elektroforez)
\n(iii) Y\u00fckl\u00fc \u00f6zellikler (elektroforez, iyon de\u011fi\u015fim kromatografisi)
\n(iv) \u00c7\u00f6z\u00fcn\u00fcrle\u015ftirme \u00f6zellikleri (tuzlama, organik \u00e7\u00f6z\u00fcc\u00fc \u00e7\u00f6keltisi)
\n\u2464 Ligandlara spesifik ba\u011flanmadaki farkl\u0131l\u0131klar (imm\u00fcnoafinite kromatografisi, biyoafinite kromatografisi, metal \u015felat afinite kromatografisi)
\n(vi) Adsorpsiyon \u00f6zellikleri (hidrofobik kromatografi)
\n(vii) denat\u00fcrasyon ve denat\u00fcrasyon (\u00fcrenin denat\u00fcrasyonu ve denat\u00fcrasyonu)<\/p>\n
\n\u2460 Bakteriyel ekspresyon sistemi: k\u0131sa d\u00f6ng\u00fc, y\u00fcksek verimlilik, d\u00fc\u015f\u00fck maliyet, ancak post-translasyonel modifikasyon yok. Temel olarak prokaryotik proteinlerin, basit \u00f6karyotik proteinlerin \u00fcretimi i\u00e7in kullan\u0131l\u0131r.
\n\u0130fade vekt\u00f6r\u00fc se\u00e7imi: pet serisi, pGEX serisi, PQE30......
\n\u0130fade su\u015flar\u0131n\u0131n se\u00e7imi: BL21(DE3), Rosetta, M15......
\n\u0130nd\u00fcksiyon ko\u015fullar\u0131: IPTG konsantrasyonu, s\u0131cakl\u0131k ve zaman s\u00fcresi
\nSafla\u015ft\u0131rma: Ni-NTA (His etiketi), Strep boncuklar\u0131, GST.....<\/p>\n
\nBakulovir\u00fcs genomu 38 kb'ye kadar eksojen gen eklenmesi i\u00e7in b\u00fcy\u00fck bir kapasiteye sahiptir.
\nBakulovir\u00fcsler b\u00f6cek h\u00fccrelerinde \u00fcretilir ve memeli h\u00fccrelerinde \u00e7o\u011falmazlar.
\nAvantajlar\u0131: Bakulovir\u00fcsler, birincil ve k\u00f6k h\u00fccreler de dahil olmak \u00fczere memeli h\u00fccre hatlar\u0131nda verimli bir \u015fekilde transd\u00fcklenebilir.
\nG\u00fcvenlik (memeli h\u00fccrelerinde \u00e7o\u011falmaz) ve g\u00f6zlemlenebilir sitopatik etkilerin olmamas\u0131
\nDondurulmu\u015f olarak saklanan \u00f6nceden transd\u00fcklenmi\u015f h\u00fccreler de test haz\u0131rlama h\u00fccreleri olarak kullan\u0131labilir
\nTa\u015f\u0131nabilirlik (farmakolojik olarak ilgili h\u00fccre tiplerinin analizi i\u00e7in)
\nTest geli\u015ftirme h\u0131z\u0131 (stabil h\u00fccre hatlar\u0131 olu\u015fturmak i\u00e7in zaman harcamaya gerek yoktur)<\/p>\n
\nProteinlerin ge\u00e7ici ifadesi: PEI veya lipozom transfeksiyon reaktifleri
\nKararl\u0131 h\u00fccre hatt\u0131 geli\u015ftirme: Flp-In\u2122 Jump-In\u2122 h\u00fccre m\u00fchendisli\u011fi platformlar\u0131
\n\u0130nd\u00fcklenebilir \u0130fade: Tetrasiklinle d\u00fczenlenen ifade
\nViral da\u011f\u0131t\u0131m arac\u0131l\u0131 ifade: fonksiyonel analiz i\u00e7in lentiviral ifade sistemi; protein \u00fcretimi i\u00e7in adenoviral ifade sistemi<\/p>\n
\nProteinleri neden safla\u015ft\u0131rmam\u0131z gerekir?
\n\u0130lgilenilen proteinlerin yap\u0131s\u0131n\u0131 ve i\u015flevini karakterize etmek.
\n(ii) Protein reg\u00fclasyonunu ve protein etkile\u015fimlerini incelemek
\n\u2462 antikor \u00fcretmek
\nSafla\u015ft\u0131rma Y\u00f6ntemleri
\nFiziksel\/kimyasal \u00f6zelliklere g\u00f6re
\nProtein boyutu: diyaliz, ultrafiltrasyon, jel filtrasyon kromatografisi
\nProtein y\u00fck\u00fc: iyon de\u011fi\u015fim kromatografisi
\nProtein hidrofobikli\u011fi: hidrofobik etkile\u015fim kromatografisi<\/p>\n
\nEtkileyen fakt\u00f6rler: diyaliz t\u00fcp\u00fc MWCO'su; tampon hacmi; diyaliz s\u00fcresi; diyaliz tamponunun de\u011fi\u015ftirilme s\u0131kl\u0131\u011f\u0131<\/p>\n
\nSantrif\u00fcj filtrasyon, protein boyutu filtre t\u00fcp\u00fcn\u00fcn g\u00f6zenek boyutundan daha k\u00fc\u00e7\u00fckt\u00fcr, t\u00fcp\u00fcn dibine kadar santrif\u00fcjlenir.<\/p>\n
\nFarkl\u0131 boyutlardaki proteinleri ay\u0131r\u0131n<\/p>\n
\nKatyon de\u011fi\u015fim kolonu: jel negatif y\u00fckl\u00fcd\u00fcr, protein pozitif y\u00fckl\u00fcd\u00fcr
\nAnyon de\u011fi\u015fim kolonu: jel pozitif y\u00fckl\u00fcd\u00fcr, protein negatif y\u00fckl\u00fcd\u00fcr
\nOrta
\n\u0130nert destek: agaroz, dekstran
\nY\u00fckl\u00fc gruplar: karboksimetil: negatif y\u00fckl\u00fc, dietilamino: pozitif y\u00fckl\u00fc
\nDengeleyici iyonlar: negatif y\u00fckl\u00fc gruplar: H+ veya Na+ pozitif y\u00fckl\u00fc gruplar: OH- veya Cl-
\nTuz konsantrasyonunu art\u0131rarak veya pH'\u0131 de\u011fi\u015ftirerek proteinlerin kademeli veya gradyan el\u00fcsyonu.<\/p>\n
\nAfinite kromatografisi, bir biyomolek\u00fcl ile ba\u015fka bir madde aras\u0131ndaki olduk\u00e7a spesifik makromolek\u00fcler ba\u011flanma etkile\u015fimlerine dayal\u0131 olarak biyomolek\u00fclleri bir kar\u0131\u015f\u0131mdan ay\u0131rma y\u00f6ntemidir.
\n\u00d6rnekler \u015funlar\u0131 i\u00e7erir: antikorlara antijen ba\u011flanmas\u0131, ligandlara enzim ba\u011flanmas\u0131, glutatyon ve GST f\u00fczyon proteinlerinin ba\u011flanmas\u0131, biyotin ba\u011flay\u0131c\u0131 molek\u00fcllere ba\u011flanan anti-biyotin proteinleri ve polihistidin f\u00fczyon proteinlerine ba\u011flanan metal iyonlar\u0131.<\/p>\n
\nBoncuklar strep etiketli proteinleri spesifik olarak adsorbe edebilir ve daha sonra biotin ile protein boncuklardan el\u00fce edilebilir. (Prensip GST pull down deneyine benzer)<\/p>\n
\nGenetik olarak tasarlanm\u0131\u015f protein A ve protein G, memeli IgG'sinin Fc b\u00f6lgesine spesifik olarak ba\u011flanabilir. Protein A ve protein G'nin kolon materyaline ba\u011flanmas\u0131yla, IgG ve alt s\u0131n\u0131flar\u0131 ve fragmanlar\u0131 afinite kromatografisi ile safla\u015ft\u0131r\u0131labilir.
\nprotein A: molek\u00fcler a\u011f\u0131rl\u0131\u011f\u0131 42kDa'd\u0131r, spa geni taraf\u0131ndan kodlan\u0131r, her biri 3 alfa heliksten olu\u015fan 5 izotipik imm\u00fcnoglobulin ba\u011flay\u0131c\u0131 yap\u0131sal alana sahiptir.
\nprotein G: spg geni taraf\u0131ndan kodlanan 65 kDa molek\u00fcler a\u011f\u0131rl\u0131\u011fa sahip, antikorun Fc ve Fab segmentlerinin yan\u0131 s\u0131ra serumdaki alb\u00fcmini de ba\u011flar. Genetik olarak tasarlanm\u0131\u015f protein G, alb\u00fcmin i\u00e7in ba\u011flanma b\u00f6lgesini kald\u0131r\u0131r ve sadece protein A'dan daha g\u00fc\u00e7l\u00fc olan Fc ba\u011flanma alan\u0131n\u0131 korur. Protein A\/protein G, alb\u00fcmini ba\u011flayan genetik olarak tasarlanm\u0131\u015f bir proteindir.
\nproteinA\/protein G: genetik olarak tasarlanm\u0131\u015f bir ba\u011flay\u0131c\u0131 proteindir. Tek ba\u015f\u0131na protein A veya protein G'den daha geni\u015f bir ba\u011flanma aral\u0131\u011f\u0131na sahip olan 4 protein A ve 2 protein G imm\u00fcnoglobulin ba\u011flama alan\u0131ndan olu\u015fur ve neredeyse t\u00fcm t\u00fcrlerden IgG'nin safla\u015ft\u0131r\u0131lmas\u0131na uygulanabilen avantajlar\u0131n\u0131 bir araya getirir.<\/p>\n
\nSDS-PAGE; HPLC; k\u00fctle spektrometrisi; Western blot; Ba\u011flanma deneyleri; Fonksiyonel deneyler; Yap\u0131sal ayd\u0131nlatma.<\/p>\n
\nTek par\u00e7ac\u0131kl\u0131 kriyo-elektron mikroskopisi (Tek Par\u00e7ac\u0131k Analizi, SPA)
\nKriyo-elektron tomografi mikroskopisi (kriyo-ET)<\/p>\nA practical sourcing checklist for enzyme, biotech, and food-ingredient topics<\/h2>\n
\n
\u00d6nerilen \u00fcr\u00fcn referanslar\u0131<\/h3>\n
\n
Al\u0131c\u0131lar ve form\u00fclat\u00f6rler i\u00e7in SSS<\/h3>\n
Because the best enzyme is the one that performs reliably under the actual process conditions and gives the desired downstream result without creating new issues.<\/p>\n
It is usually safer to pair the specification review with a pilot or application test because real substrates and process windows can change the result a lot.<\/p>\n\u015eimdi Bize Ula\u015f\u0131n!<\/b><\/strong><\/h2>\n
Fiyata ihtiyac\u0131n\u0131z varsa, l\u00fctfen a\u015fa\u011f\u0131daki forma ileti\u015fim bilgilerinizi doldurun, genellikle 24 saat i\u00e7inde sizinle ileti\u015fime ge\u00e7ece\u011fiz. Bana e-posta da g\u00f6nderebilirsiniz\u00a0info@longchangchemical.com<\/a><\/span>\u00a0\u00c7al\u0131\u015fma saatleri i\u00e7inde (8:30 - 6:00 UTC+8 Pzt.~Sat.) veya h\u0131zl\u0131 yan\u0131t almak i\u00e7in web sitesi canl\u0131 sohbetini kullan\u0131n.<\/b><\/strong><\/h4>\n
\n\n
\n Bile\u015fik Glukoamilaz<\/span><\/a><\/td>\n 9032-08-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Pullulanase<\/span><\/a><\/td>\n 9075-68-7<\/td>\n<\/tr>\n \n Ksilanaz<\/span><\/a><\/td>\n 37278-89-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Sel\u00fclaz<\/span><\/a><\/td>\n 9012-54-8<\/td>\n<\/tr>\n \n Naringinaz<\/span><\/a><\/td>\n 9068-31-9<\/td>\n<\/tr>\n \n \u03b2-Amilaz<\/span><\/a><\/td>\n 9000-91-3<\/td>\n<\/tr>\n \n Glikoz oksidaz<\/span><\/a><\/td>\n 9001-37-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Alfa-Amilaz<\/td>\n 9000-90-2<\/td>\n<\/tr>\n \n Pektinaz<\/span><\/a><\/td>\n 9032-75-1<\/td>\n<\/tr>\n \n Peroksidaz<\/td>\n 9003-99-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Lipaz<\/span><\/a><\/td>\n 9001-62-1<\/td>\n<\/tr>\n \n Katalaz<\/span><\/a><\/td>\n 9001-05-2<\/td>\n<\/tr>\n \n TANNASE<\/span><\/a><\/td>\n 9025-71-2<\/td>\n<\/tr>\n \n Elastaz<\/span><\/a><\/td>\n 39445-21-1<\/td>\n<\/tr>\n \n Urease<\/span><\/a><\/td>\n 9002-13-5<\/td>\n<\/tr>\n \n DEXTRANASE<\/span><\/a><\/td>\n 9025-70-1<\/td>\n<\/tr>\n \n L-Laktik dehidrojenaz<\/span><\/a><\/td>\n 9001-60-9<\/td>\n<\/tr>\n \n Dehidrojenaz malat<\/span><\/a><\/td>\n 9001-64-3<\/td>\n<\/tr>\n \n Kolesterol oksidaz<\/span><\/a><\/td>\n 9028-76-6<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"