<\/p>\n
Resposta r\u00e1pida:<\/strong> Enzimas e ingredientes para processamento de alimentos s\u00e3o geralmente selecionados por ajuste ao substrato, janela de pH e temperatura, dosagem e se a especifica\u00e7\u00e3o de uso final \u00e9 aceit\u00e1vel para o processo alvo. A escolha comercial mais forte \u00e9 aquela que tem desempenho consistente sob condi\u00e7\u00f5es reais de processamento.<\/p>\n <\/p>\n 1. produ\u00e7\u00e3o de enzimas<\/strong><\/p>\n As enzimas s\u00e3o produzidas a partir de microorganismos, animais e plantas, mas a principal fonte s\u00e3o os microorganismos. Como os microrganismos t\u00eam mais vantagens do que as plantas e os animais, geralmente s\u00e3o selecionadas excelentes cepas produtoras de enzimas para produzir enzimas por meio da fermenta\u00e7\u00e3o. Para aumentar a concentra\u00e7\u00e3o de enzimas no caldo de fermenta\u00e7\u00e3o, s\u00e3o selecionadas cepas excelentes, s\u00e3o desenvolvidas bact\u00e9rias geneticamente modificadas e as condi\u00e7\u00f5es de fermenta\u00e7\u00e3o s\u00e3o otimizadas. A produ\u00e7\u00e3o industrial precisa de um desempenho especial de novas enzimas, como a \u03b1-amilase resistente a altas temperaturas, a protease e a lipase resistentes a alcalinos etc. Portanto, precisamos pesquisar e desenvolver cepas para produzir um desempenho especial de novas enzimas.<\/p>\n 2. prepara\u00e7\u00e3o da enzima<\/strong><\/p>\n A tecnologia de separa\u00e7\u00e3o e purifica\u00e7\u00e3o de enzimas \u00e9 o n\u00facleo do atual \"processo de p\u00f3s-tratamento\" da biotecnologia. Usando uma variedade de t\u00e9cnicas de separa\u00e7\u00e3o e purifica\u00e7\u00e3o, de c\u00e9lulas microbianas e seu caldo de fermenta\u00e7\u00e3o, ou c\u00e9lulas animais e vegetais e seu caldo de cultura na separa\u00e7\u00e3o e purifica\u00e7\u00e3o de enzimas, feitas de prepara\u00e7\u00f5es enzim\u00e1ticas altamente ativas de pureza diferente, a fim de tornar as prepara\u00e7\u00f5es enzim\u00e1ticas mais amplamente usadas em todos os aspectos da economia nacional, \u00e9 preciso melhorar a atividade das prepara\u00e7\u00f5es enzim\u00e1ticas, a pureza e o rendimento, a necessidade de estudar as novas t\u00e9cnicas de separa\u00e7\u00e3o e purifica\u00e7\u00e3o.<\/p>\n 3. imobiliza\u00e7\u00e3o de enzimas e c\u00e9lulas<\/strong><\/p>\n A pesquisa de imobiliza\u00e7\u00e3o de enzimas e c\u00e9lulas \u00e9 a tarefa central da engenharia de enzimas. Para melhorar a estabilidade das enzimas, reutilizar as prepara\u00e7\u00f5es enzim\u00e1ticas, expandir a faixa de aplica\u00e7\u00e3o das prepara\u00e7\u00f5es enzim\u00e1ticas, usar uma variedade de m\u00e9todos de imobiliza\u00e7\u00e3o para a imobiliza\u00e7\u00e3o de enzimas, a prepara\u00e7\u00e3o de enzimas imobilizadas, como a glicose isomerase imobilizada, a carbamoilase imobilizada, etc., a determina\u00e7\u00e3o de enzimas imobilizadas e as enzimas imobilizadas para a aplica\u00e7\u00e3o de v\u00e1rios aspectos do desenvolvimento da pesquisa. A enzima imobilizada ainda tem grande vitalidade. Ela \u00e9 altamente valorizada por v\u00e1rios campos, como bioqu\u00edmica, engenharia qu\u00edmica, microbiologia, pol\u00edmeros e medicina.<\/p>\n As c\u00e9lulas imobilizadas s\u00e3o desenvolvidas com base em enzimas imobilizadas. V\u00e1rios m\u00e9todos de imobiliza\u00e7\u00e3o s\u00e3o usados para imobilizar c\u00e9lulas microbianas, c\u00e9lulas animais e c\u00e9lulas vegetais para produzir uma variedade de c\u00e9lulas biol\u00f3gicas imobilizadas. O estudo das propriedades enzim\u00e1ticas das c\u00e9lulas imobilizadas, especialmente as propriedades cin\u00e9ticas, e a pesquisa e o desenvolvimento de c\u00e9lulas imobilizadas em v\u00e1rias aplica\u00e7\u00f5es s\u00e3o um t\u00f3pico importante na engenharia de enzimas atualmente.<\/p>\n A tecnologia de imobiliza\u00e7\u00e3o \u00e9 um marco importante na moderniza\u00e7\u00e3o da tecnologia de enzimas e \u00e9 uma tecnologia revolucion\u00e1ria para superar as defici\u00eancias das enzimas naturais em aplica\u00e7\u00f5es industriais e para aproveitar ao m\u00e1ximo as caracter\u00edsticas da rea\u00e7\u00e3o enzim\u00e1tica. Pode-se dizer que n\u00e3o existe tecnologia enzim\u00e1tica moderna sem o desenvolvimento da tecnologia de imobiliza\u00e7\u00e3o.<\/p>\n 4. Modifica\u00e7\u00e3o molecular da enzima<\/strong><\/p>\n Tamb\u00e9m conhecida como modifica\u00e7\u00e3o molecular da enzima. A fim de melhorar a estabilidade da enzima, reduzir a antigenicidade, estender a meia-vida das bact\u00e9rias medicinais no corpo, usando v\u00e1rios m\u00e9todos de modifica\u00e7\u00e3o para alterar a estrutura da mol\u00e9cula da enzima, a fim de criar uma enzima natural que n\u00e3o tenha algumas caracter\u00edsticas excelentes (como maior estabilidade, aus\u00eancia de antigenicidade, resist\u00eancia \u00e0 hidr\u00f3lise da protease etc.) e at\u00e9 mesmo criar uma nova atividade enzim\u00e1tica, para expandir a aplica\u00e7\u00e3o da enzima, de modo a aumentar o valor da aplica\u00e7\u00e3o da enzima e obter maiores benef\u00edcios econ\u00f4micos e sociais.<\/p>\n A modifica\u00e7\u00e3o molecular da enzima pode ser realizada sob dois aspectos:<\/strong><\/p>\n (1) Usar a tecnologia de engenharia de prote\u00ednas para modificar o gene da estrutura da mol\u00e9cula da enzima, com a expectativa de obter uma nova enzima (enzima mutante) com excelentes caracter\u00edsticas e alta atividade, que tenha uma estrutura prim\u00e1ria e uma estrutura espacial razo\u00e1veis.<\/p>\n (2) Modifica\u00e7\u00e3o qu\u00edmica ou enzim\u00e1tica da estrutura prim\u00e1ria das prote\u00ednas da enzima, ou modifica\u00e7\u00e3o qu\u00edmica da mol\u00e9cula da enzima com modifica\u00e7\u00e3o qu\u00edmica do grupo da cadeia lateral. Para alterar as propriedades enzim\u00e1ticas. Essas enzimas s\u00e3o particularmente \u00fateis na pesquisa b\u00e1sica em enzimologia e na medicina.<\/p>\n Os microrganismos usados na produ\u00e7\u00e3o de enzimas s\u00e3o fungos filamentosos, leveduras e bact\u00e9rias em tr\u00eas grupos principais, principalmente bact\u00e9rias aer\u00f3bicas. As cepas e os usos de v\u00e1rias das principais enzimas industriais est\u00e3o listados abaixo:<\/p>\n Amilase<\/strong><\/p>\n As amilases hidrolisam o amido para produzir oligossacar\u00eddeos pastosos de malte e maltose. A produ\u00e7\u00e3o \u00e9 dominada pela fermenta\u00e7\u00e3o profunda com Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis do g\u00eanero Bacillus, o \u00faltimo dos quais produz enzimas resistentes ao calor. Fermenta\u00e7\u00f5es profundas e semi-s\u00f3lidas com cepas de Aspergillus e Rhizopus tamb\u00e9m s\u00e3o usadas para o processamento de alimentos [6] . As amilases s\u00e3o usadas principalmente na produ\u00e7\u00e3o de a\u00e7\u00facar, na desseca\u00e7\u00e3o de t\u00eaxteis, no tratamento de mat\u00e9rias-primas de fermenta\u00e7\u00e3o e no processamento de alimentos. A glucoamilase pode hidrolisar o amido em glicose, que agora \u00e9 quase inteiramente produzida por fermenta\u00e7\u00e3o profunda de Aspergillus niger, e \u00e9 usada na produ\u00e7\u00e3o de a\u00e7\u00facar, produ\u00e7\u00e3o de \u00e1lcool e processamento de mat\u00e9ria-prima de fermenta\u00e7\u00e3o.<\/p>\n Protease<\/strong><\/p>\n O uso de cepas e a produ\u00e7\u00e3o da maioria das variedades. Com bacilos em forma de l\u00edquen, bacilos pequenos e curtos e bacilos subtilis para a produ\u00e7\u00e3o de protease bacteriana por fermenta\u00e7\u00e3o profunda; com streptomyces, Aspergillus para a produ\u00e7\u00e3o de protease neutra por fermenta\u00e7\u00e3o profunda e Aspergillus para a produ\u00e7\u00e3o de protease \u00e1cida, usadas para depila\u00e7\u00e3o de couro, amaciamento de peles, produtos farmac\u00eauticos e ind\u00fastria aliment\u00edcia; com Trichoderma spp. algumas das bact\u00e9rias para a produ\u00e7\u00e3o de coalho por fermenta\u00e7\u00e3o semiss\u00f3lida na fabrica\u00e7\u00e3o de queijo em vez de coalho extra\u00eddo do est\u00f4mago do bezerro original.<\/p>\n Glucose isomerase<\/strong><\/p>\n Uma esp\u00e9cie se desenvolveu rapidamente na d\u00e9cada de 70. As c\u00e9lulas de Streptomyces s\u00e3o obtidas primeiramente por fermenta\u00e7\u00e3o profunda e, ap\u00f3s a imobiliza\u00e7\u00e3o, a solu\u00e7\u00e3o de glicose \u00e9 convertida em um xarope contendo cerca de 50% de frutose, que pode ser usado na ind\u00fastria aliment\u00edcia em vez de sacarose. Com a amilase, a glucoamilase e a glicose isomerase, etc., o amido de milho ser\u00e1 transformado em xarope, tornando-se um dos setores emergentes do a\u00e7\u00facar.<\/p>\n Sele\u00e7\u00e3o de sistemas de express\u00e3o 2 Sistema de express\u00e3o de levedura (Picrosporum) 3 A primeira op\u00e7\u00e3o \u00e9 o sistema de express\u00e3o relatado na literatura, a segunda op\u00e7\u00e3o \u00e9 o sistema de E. coli, e o sistema de levedura \u00e9 usado se a express\u00e3o em E. coli for inativa. De acordo com a fonte do gene para determinar o sistema de express\u00e3o, o gene \u00e9 acrescido de etiquetas de afinidade para facilitar a purifica\u00e7\u00e3o.<\/p>\n Modifica\u00e7\u00e3o enzim\u00e1tica Processo de design ab initio: 1. desenvolvimento do campo de for\u00e7a e algoritmo de amostragem 2. testes de alto rendimento 3. identifica\u00e7\u00e3o da estrutura<\/p>\n Evolu\u00e7\u00e3o dirigida de prote\u00ednas M\u00e9todos de gera\u00e7\u00e3o de bibliotecas de genes mutantes Evolu\u00e7\u00e3o natural: Muta\u00e7\u00e3o espont\u00e2nea, recombina\u00e7\u00e3o, sele\u00e7\u00e3o natural Embaralhamento de DNA T\u00e9cnicas de pesquisa de prote\u00ednas 2 Sistema de express\u00e3o de prote\u00ednas Sistema de express\u00e3o de levedura: ciclo curto, alta efici\u00eancia, baixo custo, existe modifica\u00e7\u00e3o p\u00f3s-tradu\u00e7\u00e3o. Haver\u00e1 glicosila\u00e7\u00e3o inadequada, modifica\u00e7\u00e3o com alto teor de manose. Usado principalmente para produzir prote\u00ednas intracelulares\/secretoras, prote\u00ednas de liga\u00e7\u00e3o a dissulfeto, prote\u00ednas glicosiladas.<\/p>\n (iii) Sistema de express\u00e3o de bacteri\u00f3fagos: alta capacidade g\u00eanica, prote\u00edna sol\u00favel, adequada para a produ\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas t\u00f3xicas, modifica\u00e7\u00f5es p\u00f3s-traducionais semelhantes \u00e0s de mam\u00edferos. As condi\u00e7\u00f5es de cultivo s\u00e3o severas e faltam algumas modifica\u00e7\u00f5es de glicosila\u00e7\u00e3o. Usado principalmente para a produ\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas de membrana, prote\u00ednas de grande porte, vacinas virais, prote\u00ednas de sinaliza\u00e7\u00e3o, citocinas, quinases. Sistemas de express\u00e3o de mam\u00edferos: tempo de ciclo longo, baixa efici\u00eancia, presen\u00e7a de modifica\u00e7\u00f5es p\u00f3s-traducionais, alta bioatividade da prote\u00edna. Usado principalmente para produzir prote\u00ednas eucari\u00f3ticas complexas, prote\u00ednas que exigem PTM preciso. 3 Purifica\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas Com base em propriedades biol\u00f3gicas: cromatografia de afinidade<\/p>\n \u2460Di\u00e1lise Ultrafiltra\u00e7\u00e3o \u2462 Cromatografia de filtra\u00e7\u00e3o em gel \u2463Cromatografia de troca i\u00f4nica \u2464 Cromatografia de afinidade Cromatografia de quelato de metal imobilizado (IMAC) usando \u00edons met\u00e1licos (Ni 2+; Co 2+; Cu 2+) ligados a poli-(His) 6<\/sub> prote\u00ednas marcadas.<\/p>\n Purifica\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas marcadas com Strep Cromatografia de afinidade prote\u00edna A\/prote\u00edna G Como identificar a prote\u00edna purificada? 4 Microscopia eletr\u00f4nica <\/p>\n Em projetos de enzimas e processamento de alimentos, o referencial de decis\u00e3o mais \u00fatil geralmente \u00e9 a adequa\u00e7\u00e3o da aplica\u00e7\u00e3o mais a estabilidade do processo: qual ingrediente funciona sob as condi\u00e7\u00f5es pretendidas de pH, temperatura, tempo e substrato sem criar um problema de qualidade ou conformidade a jusante.<\/p>\n Por que uma enzima de alta atividade n\u00e3o \u00e9 automaticamente a melhor escolha comercial?<\/strong> Ingredientes aliment\u00edcios e biotecnol\u00f3gicos devem ser selecionados apenas a partir de fichas t\u00e9cnicas?<\/strong> <\/p>\n 1.Enzyme production Enzymes are produced from microorganisms, animals and plants, but the main source is microorganisms. Since microorganisms have more advantages than plants and animals, generally excellent enzyme-producing strains are<\/p>","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[108],"tags":[],"class_list":["post-7253","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-enzyme-news"],"yoast_head":"\n
\n1 Sistema de express\u00e3o de E. coli
\n\u2460O sistema de express\u00e3o PET \u00e9 o preferido
\n\u2461 A express\u00e3o e a purifica\u00e7\u00e3o da prote\u00edna recombinante podem ser realizadas com o uso de marcadores solubilizados, sendo a MBP preferida como primeira op\u00e7\u00e3o.
\n\u2462 Preferencialmente pET24 ou pET28 (se a purifica\u00e7\u00e3o for necess\u00e1ria) com BL21(DE3), crescimento em meio TB a 37\u00b0 at\u00e9 1-1,5 DO, crescimento a 18 \u2103 por 1 hora at\u00e9 3 DO, indu\u00e7\u00e3o de IPTG a 0,5 mM por 19 horas at\u00e9 DO de at\u00e9 10.
\n\u2463 Medidas de resgate para alta express\u00e3o e baixa solubilidade: resfriamento at\u00e9 15 \u2103; altera\u00e7\u00e3o do meio para 2xYT ou ZYP5052 (autoinduzido), altera\u00e7\u00e3o do hospedeiro de express\u00e3o; truncamento dos res\u00edduos de 2 a 10 amino\u00e1cidos N-terminal e\/ou C-terminal; express\u00e3o por fus\u00e3o com prote\u00ednas altamente sol\u00faveis, como MBP; indu\u00e7\u00e3o qu\u00edmica de chaperones moleculares, coexpress\u00e3o de chaperones moleculares\/prote\u00ednas de intera\u00e7\u00e3o ou fornecimento de ligantes.
\n\u2464 Vantagens e desvantagens do sistema de express\u00e3o de E. coli
\nVantagens: mais conveniente, mais eficaz
\nDesvantagens: fraca capacidade de express\u00e3o de secre\u00e7\u00e3o; dificuldade na forma\u00e7\u00e3o de liga\u00e7\u00f5es dissulfeto; nenhuma modifica\u00e7\u00e3o p\u00f3s-tradu\u00e7\u00e3o<\/p>\n
\nVantagens: integra\u00e7\u00e3o est\u00e1vel de genes ex\u00f3genos; o promotor do gene da \u00e1lcool oxidase \u00e9 forte, e a express\u00e3o pode ser estritamente regulada pelo metanol; as prote\u00ednas recombinantes podem ser expressas nas formas intracelular ou extracelular; cont\u00e9m fun\u00e7\u00f5es de modifica\u00e7\u00e3o p\u00f3s-traducional comuns aos sistemas de express\u00e3o eucari\u00f3tica; h\u00e1 hospedeiros\/vetores comerciais, o que \u00e9 f\u00e1cil de operar; f\u00e1cil de amplificar, e a densidade de fermenta\u00e7\u00e3o \u00e9 extremamente alta.
\n\u2461 Desvantagens: forma \u00fanica de processamento p\u00f3s-tradu\u00e7\u00e3o; problema de glicosila\u00e7\u00e3o excessiva.<\/p>\n
\n\u2460Projeto racional: com base nas informa\u00e7\u00f5es sobre a estrutura e a fun\u00e7\u00e3o da prote\u00edna na altera\u00e7\u00e3o do gene codificador e no teste de express\u00e3o de recombina\u00e7\u00e3o.
\nProcedimento: primeiro, obtenha a estrutura da enzima do banco de dados BRENDA, depois modifique a estrutura da enzima e preveja a estrutura da enzima com o Alphafold2, depois fa\u00e7a a an\u00e1lise de acoplamento entre a enzima e a mol\u00e9cula do ligante com o software PyMOL e, por fim, de acordo com a nova estrutura da enzima, fa\u00e7a a muta\u00e7\u00e3o direcional das sequ\u00eancias do gene e, em seguida, expresse-a recombinantemente para obter uma nova enzima (para melhorar a estabilidade t\u00e9rmica, a efici\u00eancia catal\u00edtica e a especificidade do substrato da enzima).
\n\u2461 Projeto irracional: muta\u00e7\u00e3o ou recombina\u00e7\u00e3o de alta frequ\u00eancia de sequ\u00eancias de codifica\u00e7\u00e3o, express\u00e3o recombinante e testes de alto rendimento<\/p>\n
\n\u2460Selecionar genes originais
\n\u2461Estabele\u00e7a uma biblioteca de muta\u00e7\u00f5es gen\u00e9ticas diversificadas
\n\u2462Ligue v\u00e1rios genes mutantes em vetores e expresse-os nas cepas correspondentes, respectivamente
\n\u2463 Selecione um gene mutante de alta qualidade por meio de triagem e, em seguida, expresse o gene mutante em grandes quantidades.<\/p>\n
\n\u2460Muta\u00e7\u00e3o aleat\u00f3ria de alta frequ\u00eancia in vivo: use E. coli XL1-Red como hospedeiro de replica\u00e7\u00e3o de genes (sistema de reparo de danos ao DNA defeituoso)
\nCultivado at\u00e9 o est\u00e1gio de plat\u00f4, ocorre uma muta\u00e7\u00e3o de base em 2Kb, em m\u00e9dia.
\n\u2461Kit de mutag\u00eanese aleat\u00f3ria: taxa de muta\u00e7\u00e3o 0,1 -1,6% \/PCR, equivalente a 1-16 muta\u00e7\u00f5es de base\/gene
\n\u2462 Mutag\u00eanese de satura\u00e7\u00e3o ponto a ponto<\/p>\n
\nEvolu\u00e7\u00e3o agr\u00edcola: muta\u00e7\u00e3o espont\u00e2nea, reprodu\u00e7\u00e3o, triagem
\nEvolu\u00e7\u00e3o laboratorial: taxa de muta\u00e7\u00e3o acelerada, reprodu\u00e7\u00e3o molecular, triagem<\/p>\n
\nEstrat\u00e9gia experimental de engenharia de prote\u00ednas
\n\u2460Selecione o gene inicial para estabelecer um sistema de inativa\u00e7\u00e3o e\/ou um m\u00e9todo de triagem.
\nSe a rela\u00e7\u00e3o estrutura-fun\u00e7\u00e3o for conhecida, adote primeiro o m\u00e9todo de projeto racional.
\n\u2462Ajuste fino da muta\u00e7\u00e3o aleat\u00f3ria e triagem de alto rendimento
\n\u2463Projete do zero somente se n\u00e3o houver um gene inicial adequado.<\/p>\n
\n1 Propriedades f\u00edsicas e qu\u00edmicas relacionadas \u00e0 separa\u00e7\u00e3o e purifica\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas
\nTamanho molecular (di\u00e1lise, ultrafiltra\u00e7\u00e3o, filtra\u00e7\u00e3o em gel, centrifuga\u00e7\u00e3o)
\n\u2461Forma molecular (centrifuga\u00e7\u00e3o em gradiente, eletroforese)
\n(iii) Propriedades de carga (eletroforese, cromatografia de troca i\u00f4nica)
\n(iv) Propriedades de solubiliza\u00e7\u00e3o (saliniza\u00e7\u00e3o, precipita\u00e7\u00e3o de solvente org\u00e2nico)
\n\u2464 Diferen\u00e7as na liga\u00e7\u00e3o espec\u00edfica aos ligantes (cromatografia de imunoafinidade, cromatografia de bioafinidade, cromatografia de afinidade de quelato met\u00e1lico)
\n(vi) Propriedades de adsor\u00e7\u00e3o (cromatografia hidrof\u00f3bica)
\n(vii) desnatura\u00e7\u00e3o e desnatura\u00e7\u00e3o (desnatura\u00e7\u00e3o e desnatura\u00e7\u00e3o da ureia)<\/p>\n
\n\u2460 Sistema de express\u00e3o bacteriana: ciclo curto, alta efici\u00eancia, baixo custo, mas sem modifica\u00e7\u00e3o p\u00f3s-tradu\u00e7\u00e3o. Usado principalmente para a produ\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas procari\u00f3ticas e prote\u00ednas eucari\u00f3ticas simples.
\nSele\u00e7\u00e3o do vetor de express\u00e3o: s\u00e9rie pet, s\u00e9rie pGEX, PQE30......
\nSele\u00e7\u00e3o de cepas de express\u00e3o: BL21(DE3), Rosetta, M15......
\nCondi\u00e7\u00f5es de indu\u00e7\u00e3o: Concentra\u00e7\u00e3o de IPTG, temperatura e tempo de dura\u00e7\u00e3o
\nPurifica\u00e7\u00e3o: Ni-NTA (His tag), Strep-beads, GST.....<\/p>\n
\nO genoma do baculov\u00edrus tem uma enorme capacidade de inser\u00e7\u00e3o de genes ex\u00f3genos de at\u00e9 38 kb.
\nOs baculov\u00edrus s\u00e3o produzidos em c\u00e9lulas de insetos e n\u00e3o se replicam em c\u00e9lulas de mam\u00edferos.
\nVantagens: os baculov\u00edrus podem ser transduzidos com efici\u00eancia em linhagens de c\u00e9lulas de mam\u00edferos, incluindo c\u00e9lulas prim\u00e1rias e c\u00e9lulas-tronco.
\nSeguran\u00e7a (n\u00e3o se replica em c\u00e9lulas de mam\u00edferos) e aus\u00eancia de efeitos citop\u00e1ticos observ\u00e1veis
\nAs c\u00e9lulas pr\u00e9-transduzidas armazenadas e congeladas tamb\u00e9m podem ser usadas como c\u00e9lulas de prepara\u00e7\u00e3o para testes
\nPortabilidade (para an\u00e1lise de tipos de c\u00e9lulas farmacologicamente relevantes)
\nVelocidade de desenvolvimento de testes (n\u00e3o h\u00e1 necessidade de gastar tempo gerando linhas celulares est\u00e1veis)<\/p>\n
\nExpress\u00e3o transit\u00f3ria de prote\u00ednas: Reagentes de transfec\u00e7\u00e3o de PEI ou lipossomos
\nDesenvolvimento de linhas celulares est\u00e1veis: Plataformas de engenharia celular Flp-In\u2122 Jump-In\u2122
\nExpress\u00e3o induz\u00edvel: Express\u00e3o regulada por tetraciclina
\nExpress\u00e3o mediada por entrega viral: sistema de express\u00e3o lentiviral para an\u00e1lise funcional; sistema de express\u00e3o adenoviral para produ\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas<\/p>\n
\nPor que precisamos purificar as prote\u00ednas?
\nPara caracterizar a estrutura e a fun\u00e7\u00e3o das prote\u00ednas de interesse.
\n(ii) Estudar a regula\u00e7\u00e3o e as intera\u00e7\u00f5es entre prote\u00ednas
\n\u2462 gerar anticorpos
\nM\u00e9todos de purifica\u00e7\u00e3o
\nCom base em propriedades f\u00edsicas\/qu\u00edmicas
\nTamanho da prote\u00edna: di\u00e1lise, ultrafiltra\u00e7\u00e3o, cromatografia de filtra\u00e7\u00e3o em gel
\nCarga da prote\u00edna: cromatografia de troca i\u00f4nica
\nHidrofobicidade da prote\u00edna: cromatografia de intera\u00e7\u00e3o hidrof\u00f3bica<\/p>\n
\nFatores de influ\u00eancia: MWCO do tubo de di\u00e1lise; volume do tamp\u00e3o; tempo de di\u00e1lise; frequ\u00eancia de substitui\u00e7\u00e3o do tamp\u00e3o de di\u00e1lise<\/p>\n
\nFiltragem centr\u00edfuga: o tamanho da prote\u00edna \u00e9 menor do que o tamanho do poro do tubo de filtragem e ela \u00e9 centrifugada at\u00e9 o fundo do tubo.<\/p>\n
\nSeparar prote\u00ednas de tamanhos diferentes<\/p>\n
\nColuna de troca cati\u00f4nica: o gel \u00e9 carregado negativamente, a prote\u00edna \u00e9 carregada positivamente
\nColuna de troca ani\u00f4nica: o gel \u00e9 carregado positivamente, a prote\u00edna \u00e9 carregada negativamente
\nM\u00e9dio
\nSuporte inerte: agarose, dextrana
\nGrupos carregados: carboximetil: carregado negativamente, dietilamino: carregado positivamente
\nEquil\u00edbrio de \u00edons: grupos carregados negativamente: H+ ou Na+ grupos carregados positivamente: OH- ou Cl-
\nElui\u00e7\u00e3o gradual ou em gradiente de prote\u00ednas por meio do aumento da concentra\u00e7\u00e3o de sal ou da altera\u00e7\u00e3o do pH.<\/p>\n
\nA cromatografia de afinidade \u00e9 um m\u00e9todo de separa\u00e7\u00e3o de biomol\u00e9culas de uma mistura com base em intera\u00e7\u00f5es de liga\u00e7\u00e3o macromolecular altamente espec\u00edficas entre uma biomol\u00e9cula e outra subst\u00e2ncia.
\nOs exemplos incluem: liga\u00e7\u00e3o de ant\u00edgenos a anticorpos, liga\u00e7\u00e3o de enzimas a ligantes, liga\u00e7\u00e3o de glutationa e prote\u00ednas de fus\u00e3o GST, liga\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas antibiotina a mol\u00e9culas de liga\u00e7\u00e3o a biotina e liga\u00e7\u00e3o de \u00edons met\u00e1licos a prote\u00ednas de fus\u00e3o de polihistidina.<\/p>\n
\nAs esferas podem adsorver especificamente as prote\u00ednas com a marca strep e, em seguida, com a biotina, a prote\u00edna pode ser elu\u00edda das esferas. (O princ\u00edpio \u00e9 semelhante ao do experimento de pull down de GST)<\/p>\n
\nA prote\u00edna A e a prote\u00edna G geneticamente modificadas podem se ligar especificamente \u00e0 regi\u00e3o Fc da IgG de mam\u00edferos. Ao ligar a prote\u00edna A e a prote\u00edna G ao material da coluna, a IgG e suas subclasses e fragmentos podem ser purificados por cromatografia de afinidade.
\nProte\u00edna A: peso molecular de 42 kDa, codificada pelo gene spa, com 5 dom\u00ednios estruturais isot\u00edpicos de liga\u00e7\u00e3o \u00e0 imunoglobulina, cada um consistindo em 3 h\u00e9lices alfa.
\nProte\u00edna G: com um peso molecular de 65 kDa, codificada pelo gene spg, liga os segmentos Fc e Fab do anticorpo, bem como a albumina no soro. A prote\u00edna G geneticamente modificada remove o local de liga\u00e7\u00e3o da albumina e ret\u00e9m apenas o dom\u00ednio de liga\u00e7\u00e3o Fc, que \u00e9 mais potente do que a prote\u00edna A. A prote\u00edna A\/prote\u00edna G \u00e9 uma prote\u00edna geneticamente modificada que se liga \u00e0 albumina.
\nProte\u00edna A\/prote\u00edna G: \u00e9 uma prote\u00edna de liga\u00e7\u00e3o geneticamente modificada. Consiste em 4 dom\u00ednios de liga\u00e7\u00e3o de imunoglobulina da prote\u00edna A e 2 da prote\u00edna G, que tem uma faixa de liga\u00e7\u00e3o mais ampla do que a prote\u00edna A ou a prote\u00edna G isoladamente, e combina suas vantagens em uma s\u00f3, que pode ser aplicada \u00e0 purifica\u00e7\u00e3o de IgG de quase todas as esp\u00e9cies.<\/p>\n
\nSDS-PAGE; HPLC; espectrometria de massa; Western blot; ensaios de liga\u00e7\u00e3o; ensaios funcionais; elucida\u00e7\u00e3o estrutural.<\/p>\n
\nMicroscopia crioeletr\u00f4nica de part\u00edcula \u00fanica (Single-ParticleAnalysis, SPA)
\nMicroscopia de tomografia crioeletr\u00f4nica (cryo-ET)<\/p>\nUm checklist pr\u00e1tico de sourcing para temas de enzimas, biotecnologia e ingredientes aliment\u00edcios<\/h2>\n
\n
Refer\u00eancias de produtos recomendadas<\/h3>\n
\n
FAQ para compradores e formuladores<\/h3>\n
Porque a melhor enzima \u00e9 aquela que atua de forma confi\u00e1vel nas condi\u00e7\u00f5es reais do processo e proporciona o resultado desejado a jusante sem criar novos problemas.<\/p>\n
Geralmente \u00e9 mais seguro associar a revis\u00e3o da especifica\u00e7\u00e3o com um teste piloto ou de aplica\u00e7\u00e3o, pois substratos reais e janelas de processo podem alterar bastante o resultado.<\/p>\nEntre em contato conosco agora!<\/b><\/strong><\/h2>\n
Se precisar do Price, preencha suas informa\u00e7\u00f5es de contato no formul\u00e1rio abaixo. Normalmente, entraremos em contato dentro de 24 horas. Voc\u00ea tamb\u00e9m pode me enviar um e-mail\u00a0info@longchangchemical.com<\/a><\/span>\u00a0durante o hor\u00e1rio comercial (das 8h30 \u00e0s 18h UTC+8 de segunda a s\u00e1bado) ou use o bate-papo ao vivo do site para obter uma resposta imediata.<\/b><\/strong><\/h4>\n
\n\n
\n Composto Glucoamilase<\/span><\/a><\/td>\n 9032-08-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Pullulanase<\/span><\/a><\/td>\n 9075-68-7<\/td>\n<\/tr>\n \n Xilanase<\/span><\/a><\/td>\n 37278-89-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Celulase<\/span><\/a><\/td>\n 9012-54-8<\/td>\n<\/tr>\n \n Naringinase<\/span><\/a><\/td>\n 9068-31-9<\/td>\n<\/tr>\n \n \u03b2-Amilase<\/span><\/a><\/td>\n 9000-91-3<\/td>\n<\/tr>\n \n Glucose oxidase<\/span><\/a><\/td>\n 9001-37-0<\/td>\n<\/tr>\n \n alfa-Amilase<\/td>\n 9000-90-2<\/td>\n<\/tr>\n \n Pectinase<\/span><\/a><\/td>\n 9032-75-1<\/td>\n<\/tr>\n \n Peroxidase<\/td>\n 9003-99-0<\/td>\n<\/tr>\n \n Lipase<\/span><\/a><\/td>\n 9001-62-1<\/td>\n<\/tr>\n \n Catalase<\/span><\/a><\/td>\n 9001-05-2<\/td>\n<\/tr>\n \n TANNASE<\/span><\/a><\/td>\n 9025-71-2<\/td>\n<\/tr>\n \n Elastase<\/span><\/a><\/td>\n 39445-21-1<\/td>\n<\/tr>\n \n Urease<\/span><\/a><\/td>\n 9002-13-5<\/td>\n<\/tr>\n \n DEXTRANASE<\/span><\/a><\/td>\n 9025-70-1<\/td>\n<\/tr>\n \n L-L\u00e1ctico desidrogenase<\/span><\/a><\/td>\n 9001-60-9<\/td>\n<\/tr>\n \n Malato desidrogenase<\/span><\/a><\/td>\n 9001-64-3<\/td>\n<\/tr>\n \n Colesterol oxidase<\/span><\/a><\/td>\n 9028-76-6<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"